人BLyS 基因克隆、表达和抗人BLyS 单克隆抗体的制备
【目的】研制抗人BLyS 单克隆抗体, 以进一步探讨人BLyS 与自身免疫性疾病的关系。【方法】将人BLy S 基因 克隆到融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-1 中, 构建重组质粒pGEX-4T-1/hBLyS , 用此重组质粒转化大肠杆菌BL21, 加IPTG 诱导大肠杆菌表达GST-hBLy S 融合蛋白, 用此融合蛋白免疫BALB/c 鼠, 取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 用ELISA 法筛选阳 性克隆, 用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性。【结果】重组质粒双酶切结果和DNA 序列测定以及表达蛋白 SDS-PAGE 电泳结果表明, pGEX-4T-1/ hBLyS 重组...
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| Main Author: | |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2002-01-01
|
| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43586802/ |
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| author | 张志方 |
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| description | 【目的】研制抗人BLyS 单克隆抗体, 以进一步探讨人BLyS 与自身免疫性疾病的关系。【方法】将人BLy S 基因
克隆到融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-1 中, 构建重组质粒pGEX-4T-1/hBLyS , 用此重组质粒转化大肠杆菌BL21, 加IPTG
诱导大肠杆菌表达GST-hBLy S 融合蛋白, 用此融合蛋白免疫BALB/c 鼠, 取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 用ELISA 法筛选阳
性克隆, 用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性。【结果】重组质粒双酶切结果和DNA 序列测定以及表达蛋白
SDS-PAGE 电泳结果表明, pGEX-4T-1/ hBLyS 重组质粒可以正确表达GST-hBLyS 融合蛋白;ELISA 、免疫印迹和流式细胞仪
检测结果表明, 1c6 杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合人T 淋巴细胞膜表面BLyS 的膜外区, 属于IgG2b 亚类。
【结论】所获得的单克隆抗体具有能够结合人T 淋巴细胞上的BLyS 特异性, 可用于研究人BLyS 与自身免疫性疾病的关系。 |
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| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
| language | zho |
| publishDate | 2002-01-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| spelling | doaj-art-540a101a8d5644a488afb165f11706142025-01-15T03:33:52ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542002-01-012343586802人BLyS 基因克隆、表达和抗人BLyS 单克隆抗体的制备张志方【目的】研制抗人BLyS 单克隆抗体, 以进一步探讨人BLyS 与自身免疫性疾病的关系。【方法】将人BLy S 基因 克隆到融合蛋白原核表达载体pGEX-4T-1 中, 构建重组质粒pGEX-4T-1/hBLyS , 用此重组质粒转化大肠杆菌BL21, 加IPTG 诱导大肠杆菌表达GST-hBLy S 融合蛋白, 用此融合蛋白免疫BALB/c 鼠, 取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合, 用ELISA 法筛选阳 性克隆, 用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性。【结果】重组质粒双酶切结果和DNA 序列测定以及表达蛋白 SDS-PAGE 电泳结果表明, pGEX-4T-1/ hBLyS 重组质粒可以正确表达GST-hBLyS 融合蛋白;ELISA 、免疫印迹和流式细胞仪 检测结果表明, 1c6 杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合人T 淋巴细胞膜表面BLyS 的膜外区, 属于IgG2b 亚类。 【结论】所获得的单克隆抗体具有能够结合人T 淋巴细胞上的BLyS 特异性, 可用于研究人BLyS 与自身免疫性疾病的关系。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43586802/ |
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