肌球蛋白重链7基因来源的miR-208b-3p促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达
目的探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p（miR-208b-3p）对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。方法通过miRNA 表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-208b-3p 在血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）和高糖/葡萄糖氧化酶（G/Go）处理的C57BL/6乳小鼠心肌细胞（NMVCs）和心肌成纤维细胞（mCFs）中的表达；利用CCK8细胞增殖实验、流式细胞术和纤维化相关蛋白（包括COL1A1、COL3A1和α-SMA）表达检测来了解miR-208b-3p对mCFs纤维化表型的...
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| Main Authors: | , , , , , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2023-07-01
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| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).20230421.002/ |
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|---|---|
| author | 张梦珍 翟琳 郭林林 朱杰宁 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 |
| author_facet | 张梦珍 翟琳 郭林林 朱杰宁 李晖 徐金东 方咸宏 单志新 |
| author_sort | 张梦珍 |
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| description | 目的探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p（miR-208b-3p）对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。方法通过miRNA 表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-208b-3p 在血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）和高糖/葡萄糖氧化酶（G/Go）处理的C57BL/6乳小鼠心肌细胞（NMVCs）和心肌成纤维细胞（mCFs）中的表达；利用CCK8细胞增殖实验、流式细胞术和纤维化相关蛋白（包括COL1A1、COL3A1和α-SMA）表达检测来了解miR-208b-3p对mCFs纤维化表型的影响；双萤光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因Mtf2和Pgrmc1 3'端非翻译区（3'-UTR）的结合作用；利用RT-qPCR和Western blot 法分别检测miR-208b-3p转染的 mCFs中Mtf2 和Pgrmc1 表达；通过小干扰RNA（siRNA）抑制Mtf2和Pgrmc1表达，并检测对mCFs中纤维化相关蛋白表达的作用。结果miRNA 表达谱和RT-qPCR结果证实miR-208b-3p在糖尿病db/db小鼠心肌中表达显著升高。miR-208b-3p前体与宿主基因Myh7在db/db小鼠心肌中表达显著升高，miR-208b-3p与Myh7 mRNA在乳小鼠来源的mCFs和NMVCs中均有表达，但在NMVCs中水平更高。miR-208b-3p在Ang Ⅱ和G/Go处理后的mCFs和NMVCs中表达均明显升高。miR-208b-3p可显著增加mCFs中纤维化相关蛋白COL1A1、COL3A1和α-SMA表达，但不影响mCFs的增殖能力和细胞周期分布特征。双萤光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与Mtf2和Pgrmc1 3'-UTR有结合作用。miR-208b-3p可在转录后水平抑制mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达。miR-208b-3p、Mtf2 siRNA和Pgrmc1 siRNA均能一致性地促进mCFs中纤维化相关蛋白表达。结论miR-208b-3p通过靶向Mtf2和Pgrmc1基因发挥促进mCFs中纤维化相关基因表达的作用。 |
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| institution | Kabale University |
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| publishDate | 2023-07-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| spelling | doaj-art-4c23462ef70948f28cfead36f4c36bb32025-01-15T02:31:52ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542023-07-014464265036265230肌球蛋白重链7基因来源的miR-208b-3p促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达张梦珍翟琳郭林林朱杰宁李晖徐金东方咸宏单志新目的探究肌球蛋白重链7基因来源的微小RNA-208b-3p（miR-208b-3p）对心肌成纤维细胞纤维化表型的调控作用。方法通过miRNA 表达谱芯片分析18周龄的糖尿病db/db小鼠和db/m对照小鼠心肌中差异的miRNAs。通过实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-208b-3p 在血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）和高糖/葡萄糖氧化酶（G/Go）处理的C57BL/6乳小鼠心肌细胞（NMVCs）和心肌成纤维细胞（mCFs）中的表达；利用CCK8细胞增殖实验、流式细胞术和纤维化相关蛋白（包括COL1A1、COL3A1和α-SMA）表达检测来了解miR-208b-3p对mCFs纤维化表型的影响；双萤光素酶报告基因实验检测miR-208b-3p与潜在靶基因Mtf2和Pgrmc1 3'端非翻译区（3'-UTR）的结合作用；利用RT-qPCR和Western blot 法分别检测miR-208b-3p转染的 mCFs中Mtf2 和Pgrmc1 表达；通过小干扰RNA（siRNA）抑制Mtf2和Pgrmc1表达，并检测对mCFs中纤维化相关蛋白表达的作用。结果miRNA 表达谱和RT-qPCR结果证实miR-208b-3p在糖尿病db/db小鼠心肌中表达显著升高。miR-208b-3p前体与宿主基因Myh7在db/db小鼠心肌中表达显著升高，miR-208b-3p与Myh7 mRNA在乳小鼠来源的mCFs和NMVCs中均有表达，但在NMVCs中水平更高。miR-208b-3p在Ang Ⅱ和G/Go处理后的mCFs和NMVCs中表达均明显升高。miR-208b-3p可显著增加mCFs中纤维化相关蛋白COL1A1、COL3A1和α-SMA表达，但不影响mCFs的增殖能力和细胞周期分布特征。双萤光素酶报告基因实验显示miR-208b-3p与Mtf2和Pgrmc1 3'-UTR有结合作用。miR-208b-3p可在转录后水平抑制mCFs中Mtf2和Pgrmc1表达。miR-208b-3p、Mtf2 siRNA和Pgrmc1 siRNA均能一致性地促进mCFs中纤维化相关蛋白表达。结论miR-208b-3p通过靶向Mtf2和Pgrmc1基因发挥促进mCFs中纤维化相关基因表达的作用。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).20230421.002/心肌纤维化微小RNAmiR-208b-3p心肌成纤维细胞 |
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