过表达整合素链接激酶通过NF-kB通路促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化

过表达整合素链接激酶通过NF-kB通路促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化

摘 要: 【目的】 研究过表达整合素链接激酶(ILK)对胶质瘤细胞上皮间质转化(EMT)的调控作用及初步机制?【方法】项目组前期实验已经成功构建了重组质粒pEGFP-C1-ILK,并将其转染给SHG-44胶质瘤细胞,通过G418筛选出了稳定转染的细胞株?实验分组如下:SHG-44(空白对照组)?pEGFP-C1(空载组),及pEGFP-C1-ILK (稳转组),先检测各组中ILK的表达情况(RNA及蛋白质水平)及侵袭能力,再检测过表达ILK后对EMT标记物的影响,最后再分别应用NF-κB通路的特异性阻断剂BAY11-7028和RNA沉默的方法阻断核因子NF-κB通路,Western blot方...

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Bibliographic Details
Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 2016-01-01
Series:Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
Subjects:
稳定过表达
NF-kB
EMT
Online Access:http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43572084/
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Description
Summary:摘 要: 【目的】 研究过表达整合素链接激酶(ILK)对胶质瘤细胞上皮间质转化(EMT)的调控作用及初步机制?【方法】项目组前期实验已经成功构建了重组质粒pEGFP-C1-ILK,并将其转染给SHG-44胶质瘤细胞,通过G418筛选出了稳定转染的细胞株?实验分组如下:SHG-44(空白对照组)?pEGFP-C1(空载组),及pEGFP-C1-ILK (稳转组),先检测各组中ILK的表达情况(RNA及蛋白质水平)及侵袭能力,再检测过表达ILK后对EMT标记物的影响,最后再分别应用NF-κB通路的特异性阻断剂BAY11-7028和RNA沉默的方法阻断核因子NF-κB通路,Western blot方法检测上皮间质转化标记物E-cadherin在阻断前及阻断后的表达情况,初步探讨NF-kB通路在过表达ILK的胶质瘤细胞中对EMT的调控作用?【结果】 稳转组中ILK明显过表达,同时侵袭能力增强(Transwell小室透膜细胞数在对照组?空载组和稳转组分别为:92,87,229)?Western blot检测EMT标记物蛋白的表达:稳定转染组中snail, slug, twist, vimentin的表达较对照组及空载组的表达明显增高,而E-cadherin的表达则在稳定转染组中明显降低,差异有统计学意义(P < 0.05)?当分别用NF-kB特异性阻断剂BAY11-7028及p65 siRNA的方法阻断该通路后,稳定转染组中E-cadherin蛋白表达明显升高?【结论】 胶质瘤中过表达ILK可使侵袭能力增强,同时可下调E-cadherin,上调vimentin及Snail,Slug,Twist的表达,可能通过此机制促进脑胶质瘤细胞的上皮间质转化,NF-kB通路可能参与?调控该进程?
ISSN:1672-3554

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