LncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖
目的探讨lncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。方法分别研究<italic>PVT1,</italic>miR-15a及<italic>Bmi-1</italic>在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-<italic>PVT1</italic>(转染<italic>PVT1</...
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Main Authors: | , , , , , |
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Format: | Article |
Language: | zho |
Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2021-09-01
|
Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
Subjects: | |
Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2021.0508/ |
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author | 侯婧瑛 吴雅娴 金小岩 凌辉 于霆峰 王凌云 |
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author_sort | 侯婧瑛 |
collection | DOAJ |
description | 目的探讨lncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。方法分别研究<italic>PVT1,</italic>miR-15a及<italic>Bmi-1</italic>在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别:①空白对照组、si-<italic>PVT1</italic>(转染<italic>PVT1</italic> siRNA)和si-<italic>PVT1</italic> NC(转染<italic>PVT1</italic> siRNA scramble阴性对照);②空白对照组、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染miR-15a模拟物的阴性对照)。③空白对照组、si-<italic>Bmi-1</italic>(转染<italic>Bmi-1</italic>的siRNA)和si-<italic>Bmi-1 </italic>NC(转染<italic>Bmi-1</italic>的siRNA scramble阴性对照)。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制<italic>PVT1</italic>后检测不同组别<italic>PVT1、</italic>miR-15a和<italic>Bmi-1</italic>的表达情况。为验证miR-15a与<italic>Bmi-1</italic>之间的调节关系,将HGC-27胃癌细胞株分为3组:空白对照、miR-15a(转染miR-15a模拟物)和miR-15a NC(转染模拟物阴性对照),检测各组miR-15a和<italic>Bmi-1</italic>的表达情况。通过生物信息学网站预测<italic>PVT1 </italic>与miR-15a以及miR-15a与<italic>Bmi-1</italic>的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证<italic>PVT1 </italic>与miR-15a以及miR-15a和<italic>Bmi-1</italic>之间的靶向调节关系。在前述基础上,逆向验证<italic>PVT1</italic>、miR-15a和<italic>Bmi-1</italic>三者之间的调控关系。结果抑制<italic>PVT1、Bmi-1</italic>或者过表达miR-15a后,HGC-27胃癌细胞的OD<sub>490</sub>值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低(<italic>P</italic>< 0.01);抑制<italic>PVT1</italic>后,<italic>Bmi-1</italic>的表达出现降低,而miR-15a表达增高(<italic>P</italic>< 0.01);转染miR-15a后,miR-15a表达升高,而<italic>Bmi-1</italic>表达出现降低(<italic>P</italic>< 0.01)。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比,<italic>PVT1</italic>以及<italic>Bmi-1</italic>野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低,两者分别下降约56%和32%左右(<italic>P</italic>< 0.01)。与空白对照组和si-<italic>PVT1 </italic>NC组相比,si-<italic>PVT1</italic>组<italic>PVT1</italic>和<italic>Bmi-1</italic>表达明显下降,miR-15a表达升高,在si-<italic>PVT1</italic>组加入miR-15a<italic> </italic>inhibitor之后,miR-15a表达下降,<italic>PVT1 </italic>和<italic>Bmi-1</italic>的表达降低均出现了逆转;而si-<italic>PVT1</italic>组加入miR-15a后,miR-15a表达升高,在si-<italic>PVT1</italic>组加入miR-15a之后,miR-15a表达升高,<italic>PVT1 </italic>和<italic>Bmi-1</italic>的表达出现进一步下降。结论LncRNA<italic>-PVT1</italic>能够通过靶向抑制miR-15a上调<italic>Bmi-1</italic>(lncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路),进而促进胃癌细胞的体外增殖。 |
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institution | Kabale University |
issn | 1672-3554 |
language | zho |
publishDate | 2021-09-01 |
publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
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