LncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖

LncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路调控HGC-27胃癌细胞的体外增殖

目的探讨lncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。方法分别研究<italic>PVT1，</italic>miR-15a及<italic>Bmi-1</italic>在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别：①空白对照组、si-<italic>PVT1</italic>（转染<italic>PVT1</...

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Main Authors: 侯婧瑛, 吴雅娴, 金小岩, 凌辉, 于霆峰, 王凌云
Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 2021-09-01
Series:Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
Subjects:
长链非编码RNA-PVT1
微小RNA-15a
B细胞特异性莫洛氏鼠白血病病毒插入位点-1
胃癌细胞
增殖
Online Access:http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2021.0508/
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Summary:目的探讨lncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路在胃癌细胞体外增殖中的调控作用。方法分别研究<italic>PVT1，</italic>miR-15a及<italic>Bmi-1</italic>在HGC-27胃癌细胞体外增殖中的作用。体外培养的人胃癌细胞株HGC-27分为如下组别：①空白对照组、si-<italic>PVT1</italic>（转染<italic>PVT1</italic> siRNA）和si-<italic>PVT1</italic> NC（转染<italic>PVT1</italic> siRNA scramble阴性对照）；②空白对照组、miR-15a（转染miR-15a模拟物）和miR-15a NC（转染miR-15a模拟物的阴性对照）。③空白对照组、si-<italic>Bmi-1</italic>（转染<italic>Bmi-1</italic>的siRNA）和si-<italic>Bmi-1 </italic>NC（转染<italic>Bmi-1</italic>的siRNA scramble阴性对照）。采用MTS法检测上述组别的细胞增殖情况。在抑制<italic>PVT1</italic>后检测不同组别<italic>PVT1、</italic>miR-15a和<italic>Bmi-1</italic>的表达情况。为验证miR-15a与<italic>Bmi-1</italic>之间的调节关系，将HGC-27胃癌细胞株分为3组：空白对照、miR-15a（转染miR-15a模拟物）和miR-15a NC（转染模拟物阴性对照），检测各组miR-15a和<italic>Bmi-1</italic>的表达情况。通过生物信息学网站预测<italic>PVT1 </italic>与miR-15a以及miR-15a与<italic>Bmi-1</italic>的潜在结合位点。采用双荧光素酶报告基因技术验证<italic>PVT1 </italic>与miR-15a以及miR-15a和<italic>Bmi-1</italic>之间的靶向调节关系。在前述基础上，逆向验证<italic>PVT1</italic>、miR-15a和<italic>Bmi-1</italic>三者之间的调控关系。结果抑制<italic>PVT1、Bmi-1</italic>或者过表达miR-15a后，HGC-27胃癌细胞的OD<sub>490</sub>值以及增殖率在0 h后的不同时间点均出现显著降低（<italic>P</italic>&lt; 0.01）；抑制<italic>PVT1</italic>后，<italic>Bmi-1</italic>的表达出现降低，而miR-15a表达增高（<italic>P</italic>&lt; 0.01）；转染miR-15a后，miR-15a表达升高，而<italic>Bmi-1</italic>表达出现降低（<italic>P</italic>&lt; 0.01）。与空白对照和miR-15a模拟物阴性对照组相比，<italic>PVT1</italic>以及<italic>Bmi-1</italic>野生型报告基因的萤光素酶活性在miR-15a模拟物组呈现显著降低，两者分别下降约56%和32%左右（<italic>P</italic>&lt; 0.01）。与空白对照组和si-<italic>PVT1 </italic>NC组相比，si-<italic>PVT1</italic>组<italic>PVT1</italic>和<italic>Bmi-1</italic>表达明显下降，miR-15a表达升高，在si-<italic>PVT1</italic>组加入miR-15a<italic> </italic>inhibitor之后，miR-15a表达下降，<italic>PVT1 </italic>和<italic>Bmi-1</italic>的表达降低均出现了逆转；而si-<italic>PVT1</italic>组加入miR-15a后，miR-15a表达升高，在si-<italic>PVT1</italic>组加入miR-15a之后，miR-15a表达升高，<italic>PVT1 </italic>和<italic>Bmi-1</italic>的表达出现进一步下降。结论LncRNA<italic>-PVT1</italic>能够通过靶向抑制miR-15a上调<italic>Bmi-1</italic>（lncRNA<italic>-PVT1/</italic>miR-15a<italic>/Bmi-1</italic>通路），进而促进胃癌细胞的体外增殖。
ISSN:1672-3554

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