细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7-MIF 的构建及转化
【目的】构建并转化能在酵母菌AH109 中表达巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的穿梭表达质粒pGBKT7-MIF 。 【方法】用RT-PCR 方法从人T 淋巴细胞中扩增MIF 基因全外显子片段, 并定向克隆入细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7 中; 用PEG/ LiAC 法将pGBKT7-MIF 转化感受态酵母菌AH109 。提取转化酵母菌的质粒DNA , 转化大肠杆菌并行质粒的酶切鉴 定。【结果】扩增出人MIF cDNA 片段, 限制性内切酶酶切和DNA 测序证实获得正确的重组质粒pGBKT7-MIF ;获得可在色 氨酸缺陷培养基(SD/-trp)上生长含pGBKT7-MIF 的酵母菌...
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| Main Authors: | , , , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2002-01-01
|
| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43587472/ |
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| author | 单志新 余细勇 林秋雄 符永恒 谭虹虹 林曙光 |
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| author_sort | 单志新 |
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| description | 【目的】构建并转化能在酵母菌AH109 中表达巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的穿梭表达质粒pGBKT7-MIF 。
【方法】用RT-PCR 方法从人T 淋巴细胞中扩增MIF 基因全外显子片段, 并定向克隆入细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7 中;
用PEG/ LiAC 法将pGBKT7-MIF 转化感受态酵母菌AH109 。提取转化酵母菌的质粒DNA , 转化大肠杆菌并行质粒的酶切鉴
定。【结果】扩增出人MIF cDNA 片段, 限制性内切酶酶切和DNA 测序证实获得正确的重组质粒pGBKT7-MIF ;获得可在色
氨酸缺陷培养基(SD/-trp)上生长含pGBKT7-MIF 的酵母菌克隆。酶切鉴定表明pGBKT7-MIF 已转化入酵母菌AH109 。【结
论】成功构建穿梭质粒pGBKT7-M IF, 并转化入酵母菌AH109。 |
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| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
| language | zho |
| publishDate | 2002-01-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
| record_format | Article |
| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| spelling | doaj-art-f726d74182e54143beef1bfb4e87c2442025-01-15T03:33:20ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542002-01-012343587472细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7-MIF 的构建及转化单志新余细勇林秋雄符永恒谭虹虹林曙光【目的】构建并转化能在酵母菌AH109 中表达巨噬细胞游走抑制因子(MIF)的穿梭表达质粒pGBKT7-MIF 。 【方法】用RT-PCR 方法从人T 淋巴细胞中扩增MIF 基因全外显子片段, 并定向克隆入细菌-酵母穿梭表达质粒pGBKT7 中; 用PEG/ LiAC 法将pGBKT7-MIF 转化感受态酵母菌AH109 。提取转化酵母菌的质粒DNA , 转化大肠杆菌并行质粒的酶切鉴 定。【结果】扩增出人MIF cDNA 片段, 限制性内切酶酶切和DNA 测序证实获得正确的重组质粒pGBKT7-MIF ;获得可在色 氨酸缺陷培养基(SD/-trp)上生长含pGBKT7-MIF 的酵母菌克隆。酶切鉴定表明pGBKT7-MIF 已转化入酵母菌AH109 。【结 论】成功构建穿梭质粒pGBKT7-M IF, 并转化入酵母菌AH109。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43587472/ |
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