肺炎链球菌表面粘附素Ａ蛋白抗原表位的预测筛选及确定 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】 确定肺炎链球菌表面粘附素Ａ（ＰｓａＡ）蛋白抗原的Ｂ细胞、ＣＤ４ Ｔ细胞和ＣＤ８ Ｔ细胞表位。【方法】 通过生物信息学方法预测肺炎链球菌ＰｓａＡ蛋白分子小鼠Ｂ细胞线性表位、ＭＨＣ－Ⅰ结合肽（ＣＤ８ Ｔ细胞表位）及ＭＨＣ－Ⅱ结合肽（ＣＤ４ Ｔ细胞表位）并人工合成相应肽段；克隆重组质粒ＢＬ２１／ｐＥＴ／ＰｓａＡ并得到纯化的ｒＰｓａＡ蛋白用以免疫小鼠；分离每只免疫组和对照组小鼠的血清分别与人工合成的候选Ｂ细胞表位肽段进行间接ＥＬＩＳＡ检测，筛选Ｂ细胞表位；分离小鼠脾及淋巴结细胞并分别与人工合成的Ｔ细胞候选表位肽段体外共培养，取上清进行双夹心ＥＬＩＳＡ检测ＩＦＮ－γ的量进行初步筛选。用初筛到的表位多肽刺激小鼠的脾及淋巴结细胞并进行细胞内染色及细胞流式检测，确定ＰｓａＡ蛋白分子Ｔ细胞表位。【结果】 分析ＰｓａＡ蛋白分子的Ｂ细胞表位及ＭＨＣ－Ⅰ结合肽、ＭＨＣ－Ⅱ结合肽；得到候选Ｂ细胞表位肽１０条，ＭＨＣ－Ⅰ结合肽２１条，ＭＨＣ－Ⅱ结合肽７条，并进行了人工合成。利用分子生物学技术获得了ｒＰｓａＡ蛋白并成功免疫了小鼠。间接ＥＬＩＳＡ结果显示：肽段ＰＢ２、ＰＢ６，ＰＢ７与ｒＰｓａＡ免疫小鼠的血清发生反应，其ＯＤ４５０ｎｍ读数比相应的阴性对照小鼠显著升高；双夹心ＥＬＩＳＡ结果初步提示：肽段ＰⅠ１０、 ＰⅠ１４、 ＰⅠ１７、 ＰⅠ１８、 ＰⅠ２１以及肽段ＰⅡ２、 ＰⅡ５、 ＰⅡ６刺激免疫小鼠细胞产生的ＩＦＮ－γ量比相应的对照小鼠显著升高。细胞流式结果进一步确定：经肽段ＰⅡ２、 ＰⅡ５刺激后，免疫小鼠细胞中ＩＦＮ－γ和ＣＤ４双阳性细胞百分比较对照小鼠细胞显著升高；经肽段ＰⅠ１４、 ＰⅠ１７、 ＰⅠ２１刺激后，免疫小鼠细胞中ＩＦＮ－γ和ＣＤ８ 双阳性细胞的百分比较对照小鼠细胞显著升高。【结论】 确定了肺炎链球菌ＰｓａＡ蛋白分子的３个Ｂ细胞线性表位；２个ＣＤ４ Ｔ细胞表位；３个ＣＤ８ Ｔ细胞表位。