CircSLC8A1_005通过编码蛋白抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用

CircSLC8A1_005通过编码蛋白抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用

目的探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。方法利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞（mCFs）中过表达circSLC8A1_005，并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链（Col1a1）、Ⅲ型胶原α1链（Col3a1）和平滑肌肌动蛋白α2（Acta2）基因表达，通过EdU和划痕实验检测不同干预对mCFs的增殖和迁移能力的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circSLC8A1_005包含的潜在核糖体进入序列（IRES）的活性。通过Western blot实验检测circSLC8A1_005翻译蛋白SLC8A1-605aa及其在细胞内分布情况。双...

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Main Authors: 胡雅婷, 高原, 伍华燕, 梁俣, 李晖, 徐金东, 刘宇鹏, 单志新
Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 2024-01-01
Series:Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
Subjects:
心肌纤维化
环形RNA
circSLC8A1_005
翻译
心肌成纤维细胞
Online Access:http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ(med.sci).2024.0106/
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Summary:目的探究环形RNA circSLC8A1_005调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用及可能机制。方法利用腺病毒介导在小鼠心肌成纤维细胞（mCFs）中过表达circSLC8A1_005，并检测mCFs中纤维化相关因I型胶原α1链（Col1a1）、Ⅲ型胶原α1链（Col3a1）和平滑肌肌动蛋白α2（Acta2）基因表达，通过EdU和划痕实验检测不同干预对mCFs的增殖和迁移能力的影响。双萤光素酶报告基因实验检测circSLC8A1_005包含的潜在核糖体进入序列（IRES）的活性。通过Western blot实验检测circSLC8A1_005翻译蛋白SLC8A1-605aa及其在细胞内分布情况。双萤光素酶报告基因实验检测SLC8A1-605aa对超氧化物歧化酶2（Sod2）的转录激活作用。通过RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）实验检测SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA的结合作用。放线菌素D实验检测SLC8A1-605aa对Sod2 mRNA稳定性的影响。结果利用腺病毒可在mCFs中有效介导过表达circSLC8A1_005，过表达circSLC8A1_005可显著抑制mCFs中纤维化相关基因表达，抑制mCFs的增殖和迁移能力。双萤光素酶报告基因实验结果提示circSLC8A1_005包含的2个IRES具有活性。Western blot检测结果显示circSLC8A1_005可翻译预期大小为70 ku的SLC8A1-605aa蛋白，并主要分布于细胞核内。过表达SLC8A1-605aa和circSLC8A1_005可一致地抑制mCFs的纤维化表型。SLC8A1-605aa可特异上调超氧化物歧化酶2（Sod2）表达，但并不能转录激活Sod2表达；RIP实验结果显示SLC8A1-605aa与Sod2 mRNA有特异结合作用，而放线菌素D实验结果显示SLC8A1-605aa能够增强Sod2 mRNA的稳定性。结论CircSLC8A1_005通过翻译蛋白SLC8A1-605aa发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用，SLC8A1-605aa可能是潜在的用于心肌纤维化治疗的靶点。
ISSN:1672-3554

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