Circ_0018478通过编码HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用 - 丰嘉欣; 郭继深; 梁俣; 姜佳雪; 李晖; 徐金东; 方咸宏; 单志新 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
目的探究环状RNA circ_0018478调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用和可能机制。方法RT-qPCR检测健康器官捐献者（n=18）和心衰（n=28）患者心肌中circ_0018478及其宿主基因含E3泛素蛋白连接酶4的HECT和RLD结构域（HERC4）的表达水平。荧光原位杂交（FISH）实验和核质RNA定量检测circ_0018478的细胞分布情况，放线菌素D干预实验和核糖核酸外切酶（RNase R）消化实验检测circ_0018478的RNA稳定性。过表达腺病毒介导的circ_0018478时，分别在RNA和蛋白水平检测乳小鼠心肌成纤维细胞（mCFs）中如Ⅰ型和Ⅲ型胶原等纤维化相关基因表达的影响。利用EdU染色和Trans-well细胞迁移实验鉴定circ_0018478对mCFs增殖和迁移能力的影响。质谱shot-gun分析circ_0018478可能翻译蛋白的肽段序列。利用小干扰RNA（siRNA）抑制HERC4-193表达，检测对circ_0018478调控mCFs纤维化表型的影响。结果在心衰病人心肌中，相较于无显著表达差异的宿主基因HERC4，环形RNA circ_0018478表达显著增加。FISH和核质分离实验结果证实circ_0018478主要定位于心肌细胞胞质中。放线菌素D和RNase R消化实验证实circ_0018478具有典型的RNA稳定性。过表达circ_0018478可抑制mCFs的增殖、迁移和纤维化相关基因的表达。质谱shot-gun和Western blot检测结果提示circ_0018478可翻译预期的HERC4-193蛋白。过表达circ_0018478和HERC4-193可一致地抑制mCFs的纤维化表型，而抑制HERC4-193表达可有效减弱circ_0018478抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用（P<0.05）。结论Circ_0018478通过翻译蛋白HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用。