过表达Claudin-5增强体外培养的人视网膜微血管 内皮细胞屏障功能 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
摘 要: 【目的】 探讨过表达Claudin-5后对视网膜血管内皮细胞屏障功能的影响?【方法】 体外原代培养人视网膜血管内皮细胞(hRVEC)?当接种至transwell膜的P2 ~ P5代hRVEC近60%融合时进行慢病毒介导的转染实验?hRVEC分为对照组,慢病毒空载体组,慢病毒介导的Claudin-5高表达转染组?荧光活细胞动态显微镜观察慢病毒介导的转染效率?Western Blot检测各组细胞中Claudin-5表达水平?CCK8法检测病毒转染对细胞的毒性?待接种至transwell膜的hRVEC培养2周后建立稳定的单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型后,电阻仪检测hRVEC屏障的跨内皮电阻(TER),异硫氰酸荧光素右旋糖酐检测hRVEC屏障的通透性?【结果】慢病毒可以介导Claudin-5在hRVEC高表达,其转染率达60%,Western Blot检测证实Claudin-5蛋白表达显著增加?CCK8检测表明慢病毒转染不影响细胞的活性,对细胞毒性小;过表达Claudin-5后也不影响hRVEC的增殖;过表达Claudin-5后能降低体外单层人视网膜血管内皮细胞屏障模型的通透性,并提高其TER?【结论】 过表达Claudin-5后可以显著提高体外人视网膜血管内皮细胞屏障的功能,这为视网膜血管性疾病的治疗提供新思路?