人DNA聚合酶δ结合蛋白PDIP38的克隆、表达和纯化
［目的l克隆表达和纯化野生型及3种缺失突变型人PDIP38谷胱甘肤S转移酶(glutathionS transferase, GST)融合蛋白。【方法l采用常规PCR扩增法得到野生型及3种缺失突变型人PDIP38的cDNA;4种cDNA与GST融合载体pGEX-4T-1重组并转化大肠杆菌DH5a;采用BamHI和XhoI双酶切鉴定插入的DNA序列；采用谷胱甘肤-sepharose4B亲和层析柱纯化重组蛋白。［结果｝野生型和3种缺失突变型人PDIP38GST融 合蛋白在DHSet中高效表达；经谷胱甘肤-sepharose4B亲和层析柱一步纯化后，4种蛋白的纯度均达到85%以上。［结论】pGE...
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| Format: | Article |
|---|---|
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2004-01-01
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| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43584955/ |
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| description | ［目的l克隆表达和纯化野生型及3种缺失突变型人PDIP38谷胱甘肤S转移酶(glutathionS transferase, GST)融合蛋白。【方法l采用常规PCR扩增法得到野生型及3种缺失突变型人PDIP38的cDNA;4种cDNA与GST融合载体pGEX-4T-1重组并转化大肠杆菌DH5a;采用BamHI和XhoI双酶切鉴定插入的DNA序列；采用谷胱甘肤-sepharose4B亲和层析柱纯化重组蛋白。［结果｝野生型和3种缺失突变型人PDIP38GST融 合蛋白在DHSet中高效表达；经谷胱甘肤-sepharose4B亲和层析柱一步纯化后，4种蛋白的纯度均达到85%以上。［结论】pGEX-4T-1GST蛋白融合载体可高效表达人PDIP38蛋白；用谷胱甘肤-sepharose4B亲和层析柱一 步纯化法可简单、快速地得到高纯度的蛋白。 |
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| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
| language | zho |
| publishDate | 2004-01-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| spelling | doaj-art-e8c354d905c54c8dbfadcd8255f402d02025-01-15T03:27:09ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542004-01-012543584955人DNA聚合酶δ结合蛋白PDIP38的克隆、表达和纯化［目的l克隆表达和纯化野生型及3种缺失突变型人PDIP38谷胱甘肤S转移酶(glutathionS transferase, GST)融合蛋白。【方法l采用常规PCR扩增法得到野生型及3种缺失突变型人PDIP38的cDNA;4种cDNA与GST融合载体pGEX-4T-1重组并转化大肠杆菌DH5a;采用BamHI和XhoI双酶切鉴定插入的DNA序列；采用谷胱甘肤-sepharose4B亲和层析柱纯化重组蛋白。［结果｝野生型和3种缺失突变型人PDIP38GST融 合蛋白在DHSet中高效表达；经谷胱甘肤-sepharose4B亲和层析柱一步纯化后，4种蛋白的纯度均达到85%以上。［结论】pGEX-4T-1GST蛋白融合载体可高效表达人PDIP38蛋白；用谷胱甘肤-sepharose4B亲和层析柱一 步纯化法可简单、快速地得到高纯度的蛋白。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43584955/ |
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