miR-155与<italic>CEBPB</italic>的靶向验证及繁殖性能相关基因的检测

miR-155与<italic>CEBPB</italic>的靶向验证及繁殖性能相关基因的检测

<italic>CEBPB</italic>具有调节黄体生成促进排卵的作用，对动物繁殖性能极为重要，试验旨在通过构建<italic>CEBPB</italic>的3'端非翻译区（3'UTR）双荧光素酶报告基因载体，验证MicroRNA-155（miR-155）调控<italic>CEBPB</italic>的分子机制。应用在线生物信息学软件预测miR-155与<italic>CEBPB</italic>基因3'UTR的靶向结合区，PCR扩增获取民猪组织基因组的<i...

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Main Authors: 李军义, 刘娣, 马红, 汪亮, 霍秀鹏, 郝丽
Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Department of Chinese Journal of Wildlife 2023-05-01
Series:野生动物学报
Subjects:
繁殖性能
<italic>CEBPB</italic>基因
miR-155
Online Access:http://ysdw.nefu.edu.cn/thesisDetails#10.12375/ysdwxb.20230209
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Description
Summary:<italic>CEBPB</italic>具有调节黄体生成促进排卵的作用，对动物繁殖性能极为重要，试验旨在通过构建<italic>CEBPB</italic>的3'端非翻译区（3'UTR）双荧光素酶报告基因载体，验证MicroRNA-155（miR-155）调控<italic>CEBPB</italic>的分子机制。应用在线生物信息学软件预测miR-155与<italic>CEBPB</italic>基因3'UTR的靶向结合区，PCR扩增获取民猪组织基因组的<italic>CEBPB</italic>的3'UTR，将其插入psi-Check-2载体，构建野生型（wt-3'UTR）和突变型重组表达载体（mut-3'UTR），鉴定正确后，分别与miR-155模拟物（mimics）/抑制物（inhibitor）/阴性对照物（NC）共转染到PK15细胞，检测荧光素酶活性及<italic>CEBPB</italic>表达情况。结果表明：成功构建了<italic>CEBPB</italic>的3'UTR野生型和突变型表达载体，双荧光素酶报告基因检测显示wt-3'UTR/miR-155 mimics组的萤火虫荧光素酶活性受到显著抑制（<italic>p</italic>&lt;0.05）；而mut-3'UTR/miR-155 inhibitor组的萤火虫荧光素酶相对活性与对照组相比变化不显著（<italic>p</italic>&gt;0.05）。实时荧光定量结果显示，miR-155 mimics组<italic>CEBPB</italic>、<italic>BMP1</italic>和<italic>PPARG</italic>表达水平显著低于miR-155 NC组（<italic>p</italic>&lt;0.05），而miR-155 inhibitor组<italic>CEBPB</italic>表达水平高于miR-155 NC组（<italic>p&lt;</italic>0.05）。综上表明，miR-155可以靶向负调控<italic>CEBPB</italic>的表达。
ISSN:2310-1490

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