GATA-3 基因表达质粒的构建及在大鼠脑细胞中的表达 - 杨培增; 黄祥坤; 纪淑兴 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】 构建GATA-3基因正义?反义重组质粒,为进一步研究GATA-3在T细胞发育分化中的作用提供基础?【方法】 采用PCR技术扩增GATA-3基因,通过酶切?连接?转化等分子生物学技术,将该全长基因亚克隆至表达载体pCDNA3,构建质粒后转染大肠杆菌,并在大肠杆菌中扩增?同时用脂质体法感染大鼠脑细胞?【结果】 从大鼠脑细胞中成功地克隆出全长1335 bp的GATA-3基因,并经序列分析筛选证实GATA-3基因以正向?反向重组转染入载体,且在大肠杆菌中得到扩增,同时用RT-PCR方法检测到反义重组体对大鼠脑细胞表达该基因具有抑制作用?【结论】通过基因克隆方法成功构建了GATA-3基因正义?反义表达质粒,并初步证实反义GATA-3具有抑制细胞正常表达作用,为深入研究GATA-3对T细胞发育分化的影响奠定了基础?