稳定表达人水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4的建立及应用

稳定表达人水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4的建立及应用

【目的】 建立一种可临床应用的并能稳定表达水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4,用于检测视神经脊髓炎患者血清中的AQP4抗体65377; 【方法】 构建有AQP4基因的表达载体,利用脂质体将载体转入HEK293细胞,G418筛选,RT-PCR65380;间接免疫荧光检测稳定细胞系中水通道蛋白4的表达及分布65377;细胞间接免疫荧光检测20例NMO患者65380;20例MS患者65380;30例健康对照血清中的AQP4抗体,并同鼠脑间接免疫荧光检测法比较65377; 【结果】 限制性酶切消化65380;PCR65380;测序结果证明载体构建成功65377;间接免疫荧光证实稳定细胞系中...

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Bibliographic Details
Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 2010-01-01
Series:Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
Subjects:
视神经脊髓炎
NMO-IgG
水通道蛋白4( AQP4)
HEK293
Online Access:http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43577607/
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Description
Summary:【目的】 建立一种可临床应用的并能稳定表达水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4,用于检测视神经脊髓炎患者血清中的AQP4抗体65377; 【方法】 构建有AQP4基因的表达载体,利用脂质体将载体转入HEK293细胞,G418筛选,RT-PCR65380;间接免疫荧光检测稳定细胞系中水通道蛋白4的表达及分布65377;细胞间接免疫荧光检测20例NMO患者65380;20例MS患者65380;30例健康对照血清中的AQP4抗体,并同鼠脑间接免疫荧光检测法比较65377; 【结果】 限制性酶切消化65380;PCR65380;测序结果证明载体构建成功65377;间接免疫荧光证实稳定细胞系中有AQP4表达,且主要分布在细胞膜上65377;20 例NMO患者血清中11例NMO-IgG阳性,18例AQP4抗体阳性,滴度在1 ∶ 60 - 1 ∶ 15 360之间,而MS患者仅检测到1例阳性,健康对照未检测到阳性65377; 【结论】 成功构建稳定表达水通道蛋白4的胚肾细胞系HEK293/AQP4 ,并检测出国人NMO患者血清中存在AQP4抗体,且敏感性高于鼠脑法,可以有效的鉴别视神经脊髓炎和多发性硬化65377; 关键词: 视神经脊髓炎; NMO-IgG; 水通道蛋白4( AQP4); HEK293
ISSN:1672-3554

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