ARF鸟苷酸交换因子BIGs对高尔基体相关的囊泡转运的调控作用 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】 探讨ARF鸟苷酸交换因子BIG1和BIG2在高尔基体相关囊泡转运方面的功能。【方法】 利用脂质体将 siRNA干扰序列转入细胞中,western blotting方法检测转染效率; 利用细胞免疫荧光染色方法检测Hela细胞中 BIGs蛋白水平的表达分布; 采用Alexa568标记的转铁蛋白孵育Hela细胞,检测转铁蛋白相关的内吞体循环;利用脂质体转染VSVG-YFP病毒质粒,检测新生蛋白经从内质网经高尔基体转运至胞膜的途径。【结果】 BIG1和BIG2的siRNA干扰效率均高于70%,且特异性良好;干扰掉BIGs后,细胞内TGN230结构变松散,呈现短片状或点状;干扰BIG2可导致细胞内转铁蛋白的积聚,而同时干扰BIG1则可进-步加剧转铁蛋白的积聚;BIG1或/和BIG2干扰均抑制了新生蛋白的从内质网向高尔基及细胞表面的转运过程。【结论】 BIGs蛋白主要位于反面高尔基体网络,对维持其结构完整性非常重要;它们均参与调控高尔基体相关的囊泡转运,两者具有协同作用。