LncRNA Xist通过调控SDF-1/CXCR4轴促进大鼠骨髓间充质干细胞增殖与迁移 - 段亚妮; 木拉提·阿比来列提; 朱雁秋; 唐镭蕾; 朱俊颖; 覃杰 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】探讨lncRNA Xist在大鼠骨髓间充质干细胞（BMSC）增殖和迁移中的作用及其可能机制。【方法】取3周龄的雌性SD大鼠的股骨和胫骨，分离BMSC细胞，体外培养并鉴定。设计并筛选对lncRNA Xist沉默效率高的siRNA；利用Lipo2000分别将si-Xist和si-NC转染入实验组（si-Xist组）和对照组（si-NC组）BMSC中。CCK-8实验检测各组BMSC增殖能力。划痕及Transwell迁移实验检测各组BMSC横向和纵向迁移能力。qPCR验证lncRNA Xist的沉默效率及检测各组BMSC中SDF-1和CXCR4mRNA水平的相对表达量；western blot检测各组BMSC中CXCR4蛋白水平的相对表达量。【结果】BMSC第3代细胞呈梭状、漩涡状生长，流式细胞术示CD11b（-）、CD34（-）、CD45（-）、CD44（+）、CD90（+）、CD105（+）。使用siRNA干扰BMSC中lncRNA Xist的表达，三条siRNA沉默效率分别为67.92%、68.72%、98.32%。CCK-8实验证明，12h时两组间OD450差异无统计学意义（P>0.05），而在24h和48h时，si-Xist组OD450均低于si-NC组（P<0.001、P<0.01）。划痕实验显示，si-Xist组伤口愈合百分比低于si-NC组（P<0.05）；Transwell迁移实验显示，si-Xist组6h迁移细胞数低于si-NC组（P<0.001）。qPCR实验证明，在mRNA水平，si-Xist组CXCR4相对表达量低于si-NC组（P<0.05），而SDF-1在两组间差异无统计学意义（P>0.05）；Western blot实验证实，在蛋白水平，si-Xist组CXCR4相对表达量低于si-NC组（P<0.05）。【结论】LncRNA Xist通过调控CXCR4的表达，提高大鼠BMSC的增殖、迁移能力。