单克隆抗体TNT-1的纯化、F（ab）2片段化及其免疫活性的测定

单克隆抗体TNT-1的纯化、F（ab）2片段化及其免疫活性的测定

TNT-1是-种鼠IgG2a单抗,已用于肿瘤病人的临床试验。本文将介绍从腹水中进一步纯化TNT-1的方法及制备其F（ah′）2片段的条件。经Protein A亲和柱层析从小鼠腹水中提取出的lgG,再通过阳离子交换树脂柱Mono S,用缓冲液A（20 mmol/L MES,pH6.3）和缓冲液B（lmol/L NaCI）,在快速蛋白液相色层（FPLC）系统上进行梯度洗脱分离,可制得纯净的TNT-1抗体,其免疫活性可达80％～85％;经纯化的TNT-1,用胃蛋白酶消化,制备F（ah′）2片段,其消化条件是:酶的用量为抗体的1/250,pH3.8,温度37℃,时间4～5 /小时。消化后的混合物,用p...

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Bibliographic Details
Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 1991-01-01
Series:Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
Subjects:
单克隆抗体
TNT-1
F（ab&rsquo
）
纯化
免疫活性
Online Access:http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/44124456/
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Description
Summary:TNT-1是-种鼠IgG2a单抗,已用于肿瘤病人的临床试验。本文将介绍从腹水中进一步纯化TNT-1的方法及制备其F（ah′）2片段的条件。经Protein A亲和柱层析从小鼠腹水中提取出的lgG,再通过阳离子交换树脂柱Mono S,用缓冲液A（20 mmol/L MES,pH6.3）和缓冲液B（lmol/L NaCI）,在快速蛋白液相色层（FPLC）系统上进行梯度洗脱分离,可制得纯净的TNT-1抗体,其免疫活性可达80％～85％;经纯化的TNT-1,用胃蛋白酶消化,制备F（ah′）2片段,其消化条件是:酶的用量为抗体的1/250,pH3.8,温度37℃,时间4～5 /小时。消化后的混合物,用protein A亲和结合法除去完整的IgG,其余的F（ab′）2和Fab、Fc等片段,在Mono S柱上,按前述的条件分离。产物TNT-1或F（ah′）2的免疫活性,用标记抗体和过量抗原结合的方法测定;分高纯化过程中的洗脱峰,用间接免疫荧光技术监测其活性。结果戾明,TNR-1的F（ab′）2片段的制备是成功的,色层分离纯化的方法简便而有效,并已成功地应用于批量生产。
ISSN:1672-3554

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