人芳香族氨基酸脱羧酶基因的克隆及测序
【目的】用RT-PCR 法获得人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因全序列, 并建立优化方法。【方法】 从人嗜铬细胞瘤中提取组织总RNA , 自行设计引物, 采用两步RT-PCR 法扩增出长约1 550 bp 的基因片断, 凝胶回收后与高 效克隆PCR 产物的新型载体T-载体连接, 并转化入大肠杆菌, 通过蓝白斑反应筛选出重组体, 质粒提取后进行重组体的酶切 鉴定及基因测序。【结果】BamH Ⅰ 和Hin dⅢ 酶切证实了目的基因同克隆载体进行了有效的连接, 基因测序证实了所克隆的 片断为人AADC 基因。【结论】本实验通过对引物, Taq 酶的选择及反应条件的优化, 保证了扩...
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| Main Authors: | , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2001-01-01
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| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43587311/ |
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| author | 刘 军 邢诒刚 梁秀龄 陶恩祥 |
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| author_sort | 刘 军 |
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| description | 【目的】用RT-PCR 法获得人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)基因全序列, 并建立优化方法。【方法】
从人嗜铬细胞瘤中提取组织总RNA , 自行设计引物, 采用两步RT-PCR 法扩增出长约1 550 bp 的基因片断, 凝胶回收后与高
效克隆PCR 产物的新型载体T-载体连接, 并转化入大肠杆菌, 通过蓝白斑反应筛选出重组体, 质粒提取后进行重组体的酶切
鉴定及基因测序。【结果】BamH Ⅰ 和Hin dⅢ 酶切证实了目的基因同克隆载体进行了有效的连接, 基因测序证实了所克隆的
片断为人AADC 基因。【结论】本实验通过对引物, Taq 酶的选择及反应条件的优化, 保证了扩增的有效性和特异性。新型
的克隆载体明显提高了克隆效率。基因测序证实了AADC 基因扩增的成功。本研究为AADC 基因治疗帕金森病等多巴胺能
缺乏疾病的研究打下了基础。 |
| format | Article |
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| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
| language | zho |
| publishDate | 2001-01-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
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