构建人CD23及其反义RNA的逆转录病毒表达重组体
利用CD23cDNA全基因克隆pUCD976,分别以限制性内切酶EcoRI和XbaI酶切该重组质粒DNA,回收1.0kb的CD23cDNA全基因、HindⅢ酶切后回收3’端607bp的结合区段基因以及EcoRⅠ和HindⅡ酶切回收5’端403bp的调控区段基因。将各回收片段先以Klenow酶补平后,插入已补平的pZIP逆转录病毒载体BamHⅠ单切点,利用地高辛素标记的CD23cDNA全基因探针,以斑点核酸杂交筛选逆转录病毒重组体,结合用限制性内切酶BamHI和/或BglⅡ酶切鉴定插入方向,最终获得正、反向插入的CD23全基因-逆转录病毒重组体各2个,反向插入3’端和5’端部分基因片段的重组体分...
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Format: | Article |
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Language: | zho |
Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
1996-01-01
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Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
Subjects: | |
Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43590435/ |
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collection | DOAJ |
description | 利用CD23cDNA全基因克隆pUCD976,分别以限制性内切酶EcoRI和XbaI酶切该重组质粒DNA,回收1.0kb的CD23cDNA全基因、HindⅢ酶切后回收3’端607bp的结合区段基因以及EcoRⅠ和HindⅡ酶切回收5’端403bp的调控区段基因。将各回收片段先以Klenow酶补平后,插入已补平的pZIP逆转录病毒载体BamHⅠ单切点,利用地高辛素标记的CD23cDNA全基因探针,以斑点核酸杂交筛选逆转录病毒重组体,结合用限制性内切酶BamHI和/或BglⅡ酶切鉴定插入方向,最终获得正、反向插入的CD23全基因-逆转录病毒重组体各2个,反向插入3’端和5’端部分基因片段的重组体分别为4个和1个。为进行CD23反义RNA的研究和真核表达CD23提供了可靠的物质基础。 |
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institution | Kabale University |
issn | 1672-3554 |
language | zho |
publishDate | 1996-01-01 |
publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
spelling | doaj-art-9a3f9c5921a84b2bbd91771da5dd23b22025-01-15T03:39:36ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35541996-01-011743590435构建人CD23及其反义RNA的逆转录病毒表达重组体利用CD23cDNA全基因克隆pUCD976,分别以限制性内切酶EcoRI和XbaI酶切该重组质粒DNA,回收1.0kb的CD23cDNA全基因、HindⅢ酶切后回收3’端607bp的结合区段基因以及EcoRⅠ和HindⅡ酶切回收5’端403bp的调控区段基因。将各回收片段先以Klenow酶补平后,插入已补平的pZIP逆转录病毒载体BamHⅠ单切点,利用地高辛素标记的CD23cDNA全基因探针,以斑点核酸杂交筛选逆转录病毒重组体,结合用限制性内切酶BamHI和/或BglⅡ酶切鉴定插入方向,最终获得正、反向插入的CD23全基因-逆转录病毒重组体各2个,反向插入3’端和5’端部分基因片段的重组体分别为4个和1个。为进行CD23反义RNA的研究和真核表达CD23提供了可靠的物质基础。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43590435/抗原CDRNA反义受体IgE核酸杂交逆转录病毒科克隆分子 |
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