甲状腺乳头状癌雌激素受体β表达及其 5′非翻译区甲基化 - 苟茜; 许琳婉; 刘智敏 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】研究甲状腺乳头状癌（PTC）中雌激素受体β基因（ERβ）表达及 5′非翻译区甲基化状态，探讨ERβ在 PTC 中低表达的原因。【方法】应用 Western blot 和免疫组织化学染色法检测正常甲状腺细胞Nthy-ori3-1、PTC 细胞 BCPAP 以及正常甲状腺组织、甲状腺结节性增生组织和 PTC 组织ERβ蛋白表达；应用 qRT-PCR 检测各细胞和组织中 ERβ mRNA（0K-1）、ERβ mRNA（0N-1）和总 ERβ mRNA 表达水平；亚硫酸氢盐测序分析各细胞和组织中 ERβ 基因启动子 0K、启动子 0N 和外显子 0N 的 CpG 岛甲基化状态；DNA 甲基化转移酶抑制剂5-aza-2′-deoxycytidine（5-aza-dC）处理 Nthy-ori3-1 细胞和 BCPAP 细胞后，qRT-PCR 检测 ERβ mRNA（0K-1）、ERβ mRNA（0N-1）和总 ERβ mRNA 表达水平。【结果】与正常甲状腺细胞相比，ERβ蛋白表达水平在 PTC 细胞中明显下降（P<0.01）；ERβ在正常甲状腺组织、结节性增生组织和 PTC 组织中阳性表达数分别为5/10 例、3/10 例、 0，与正常甲状腺组织相比，ERβ在 PTC 组织中的蛋白表达水平显著降低（P<0.05）；与正常甲状腺细胞和组织相比，ERβ mRNA（0N-1）和总 ERβ mRNA 在 PTC 中的表达水平明显降低（P<0.01），而 ERβ mRNA（0K-1）差异无统计学意义（P>0.05）；ERβ基因启动子 0N 和外显子 0N 甲基化程度在 PTC 进程中逐渐增加，而启动子 0K 在常甲状腺、结节性增生和 PTC 组织和细胞中均未甲基化或低甲基化；5-aza-dC 使 BCPAP 细胞中ERβ mRNA（0N- 1）和总 ERβ mRNA 重新表达，但对 ERβ mRNA（0K-1）的表达无影响。【结论】ERβ基因 5′非翻译区甲基化使PTC 中 ERβ基因表达降低，尤其是启动子0N 和外显子 0N 异常甲基化。