稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的U937白血病细胞株的建立及初步特性分析

稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的U937白血病细胞株的建立及初步特性分析

摘 要: 【目的】 构建稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的人急性单核细胞白血病U937细胞株,并初步分析过表达p62基因对U937细胞的影响?【方法】 首先在空载体MSCV-IRES-GFP(MIG)基础上构建重组质粒MSCV-p62-IRES-GFP(MPIG),分别用MIG及MPIG载体进行病毒包装,并感染U937细胞,用流式细胞分选仪分选出绿色荧光细胞,获得U937-GFP和U937-p62稳定细胞株,利用流式细胞仪及Western blot分别检测GFP细胞的阳性率及p62蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定U937-GFP和U937-p62细胞的生长情况,流式细胞术检测...

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Bibliographic Details
Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 2015-01-01
Series:Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
Subjects:
U937细胞株
p62
载体构建
Online Access:http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43571598/
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Summary:摘 要: 【目的】 构建稳定过表达外源p62/SQSTM1基因的人急性单核细胞白血病U937细胞株,并初步分析过表达p62基因对U937细胞的影响?【方法】 首先在空载体MSCV-IRES-GFP(MIG)基础上构建重组质粒MSCV-p62-IRES-GFP(MPIG),分别用MIG及MPIG载体进行病毒包装,并感染U937细胞,用流式细胞分选仪分选出绿色荧光细胞,获得U937-GFP和U937-p62稳定细胞株,利用流式细胞仪及Western blot分别检测GFP细胞的阳性率及p62蛋白表达水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定U937-GFP和U937-p62细胞的生长情况,流式细胞术检测髓系细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达情况?【结果】 荧光显微镜观察结果显示,MIG和MPIG病毒感染后,U937-GFP和U937-p62细胞均表达绿色荧光蛋白;经流式细胞仪分选后,U937-GFP和U937-p62细胞中GFP阳性表达率分别达98.5%和87.3%?Western blot的结果显示U937-p62细胞中p62蛋白表达较U937-GFP显著升高?MTT实验结果显示,与U937-GFP细胞相比,U937-p62细胞的生长速率加快?流式结果显示U937-GFP细胞和U937-p62细胞表达细胞表面分化抗原CD11b及CD14无明显差异? 【结论】 成功构建了p62基因过表达的U937稳定细胞株,过表达p62可促进U937细胞增殖,并不能促进U937细胞的分化?
ISSN:1672-3554

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