构建MS2-RIP方法用于鉴定lncRNA DANCR在肿瘤细胞中的相互作用分子 - 巫孟师; 熊敏敏; 彭丹; 韩雪; 钟小敏 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
目的为了探讨lncRNA DANCR在肿瘤细胞中的作用机制，本研究拟构建一种新的MS2-RIP方法用于鉴定DANCR的相互作用分子。方法利用MS2噬菌体衣壳蛋白可与噬菌体复制酶编码基因5’端一段由19个碱基组成的RNA茎环结构序列，即MS2结合位点（MS2 Binding Site，MS2 BS）高效结合的特点，构建串联表达MS2 BS和DANCR的过量表达质粒，通过MS2蛋白与MS2 BS的亲和作用，使DANCR得到富集，并且同步捕获与DANCR相互作用的分子，用于进一步分析鉴定。结果成功构建串联表达MS2 BS和DANCR的过量表达质粒用于MS2-RIP实验，该实验可显著富集DANCR以及作为阳性对照的DANCR结合蛋白EZH2。结论基于MS2蛋白与MS2结合位点的高效结合特性，我们针对lncRNA DANCR建立了MS2-RIP方法。该方法可有效富集DANCR以及与DANCR结合的生物活性分子，为研究DANCR的作用机制提供一种新的技术手段。