靶向SMPD1基因的RNA干扰对人成纤维细胞凋亡的保护作用 - 高军; 周灿权; 张仁礼; 马芸 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】以人包皮成纤维细胞（HFF）为模型,通过系统比较针对不同靶点的小干扰RNA（siRNA）对酸性鞘磷脂酶1（SMPD1）基因的沉默效果,筛选获得最有效的小干扰RNA序列,同时观察沉默SMPD1对细胞凋亡的保护作用。【方法】设计合成三对靶向SMPD1基因的小干扰RNA作为实验组,同时设立阴性对照组和脂质体组（lipofectamine 2000）,瞬时转染原代培养的HFF细胞,采用荧光定量RT-PCR法及Western blot测定SMPD1表达抑制情况,并用化疗药物丝裂霉素诱导细胞凋亡,MTT法检测siRNA转染对细胞的保护作用。【结果】小干扰RNA1,2,3对SMPD1基因mRNA的抑制效率分别为96.3%,39%,63.2%,以siRNA1最高,最佳浓度为50nmol/L,最佳作用时间为48h。SMPD1蛋白在48h出现沉默效果,96h开始恢复。50nmol/L的siRNA1可以有效抑制化疗药物丝裂霉素引起的细胞凋亡,细胞存活率为73.8%,与对照组存活率65.4%比较差异具有统计学意义。【结论】三对siRNA均具有一定的靶基因沉默效果,其中siRNA1效果最佳,沉默效率达到96.3%;靶向SMPD1基因的siRNA能有效抑制人成纤维细胞的凋亡。