优化精液处理中的密度梯度离心法以提高受精结局的探讨 - 孙桂花; 张志强; 陈文秋; 李婷婷 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
目的本研究旨在改进生殖男科领域现有的精液处理方法，特别是针对双层密度梯度法中的300 ×g 20 min处理条件，以提高受精结局。方法收集2020年7月和9月以及2022年3月和5月在中山大学附属第六医院生殖医学中心进行辅助生殖助孕的1 623例患者的精液标本进行实验。预实验中，比较四种不同的双层密度梯度方法（200 ×g 10 min、200 ×g 20 min、300 ×g 10 min和300 ×g 20 min）处理后标本的精子DNA碎片率和回收率。然后，筛选出一种最优的方法作为新方法，并与目前在用的旧方法（300 ×g 20 min双层梯度法）进行对比，检验受精率是否有统计学差异。在新方法的基础上，进一步优化为单层密度梯度法，并与双层密度梯度法进行对比，检验是否存在统计学差异。实验过程中严格控制温度、离心速度和离心时间，同时记录每组样本的数量和处理条件。结果在保证足够的精子回收率的基础上，发现四种双层密度梯度法中300 ×g 10 min的精子DNA碎片率低于300 ×g 20 min。因此，选择300 ×g 10 min作为新方法进行试验。结果表明，新方法300 ×g 10 min的总受精率、二核体（2pn）受精率均高于300 ×g 20 min，且差异有统计学意义（P<0.05）；300 ×g 10 min的卵裂率也略高于300 ×g 20 min，但差异没有统计学意义（P>0.05）。单层密度梯度法的总受精率、2pn受精率均高于双层密度梯度法，但差异没有统计学意义（P>0.05）；单层密度梯度法的卵裂率高于双层密度梯度法，囊胚形成率低于双层密度梯度法，且差异均有统计学意义（P<0.05）。结论相对于现有的300 ×g 20 min双层梯度法，300 ×g 10 min双层梯度法成功提高了总受精率、2pn受精率、卵裂率，缩短了精液优化处理的时间；而单层密度梯度法虽提高了卵裂率、节约了试剂成本和操作时间，但其囊胚形成率却出现了下降的情况。这些发现为生殖男科领域的精液处理方法提供了有益的指导和启示。