rAAV1-EGFP和rAAV2-EGFP转染犬骨髓间充质 干细胞的比较 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】 研究不同血清型腺相关病毒(rAAV)载体介导的增强绿色荧光蛋白基因(EGFP)对体外培养犬骨髓间充质干细胞(MSC)的转染效率及其毒性作用65377;【方法】 应用密度梯度离心法及贴壁筛选法分离培养犬MSC,倒置显微镜及Giemsa染色观察细胞形态,透射电镜观察其超微结构,流式细胞仪鉴定其表面标记物65377;取第3代MSC,以MOI为104 ~ 105 v.g./cell 的rAAV1-EGFP 和rAAV2-EGFP进行转染,3 d65380;7 d65380;21 d后荧光显微镜观察检测转染效率;MTT法检测rAAV1-EGFP 和rAAV2-EGFP对MSC的毒性作用65377; 【结果】 原代及传代培养的MSC呈梭形外观,具有较强的增殖能力65377;MSC超微结构显示其胞体较小,细胞核/浆比例大,胞浆少,染色质较疏松65377;细胞表面抗原CD2965380;CD44表达阳性,CD34表达阴性65377;随MOI的增加及时间的延长,rAAV1-EGFP65380;rAAV2-EGFP对犬MSC的转染效率逐渐增加,rAAV2-EGFP转染效率明显高于rAAV1-EGFP(P < 0.01)65377;转染MSC细胞后,细胞生长正常,MTT法显示各转染组与未转染组的OD值无统计学差异(P > 0.05)65377; 【结论】 相对犬MSC,rAAV2是一种比rAAV1更优越的转基因载体,而且对细胞生长无明显抑制,做为组织工程种子细胞的载体是安全可行的65377;