人血管内皮生长因子的克隆表达及活性鉴定 - 李子俊; 余细勇 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】克隆人血管内皮生长因子165 基因, 并测定蛋白质的表达及鉴定其活性。【方法】用PCR 法从人心脏 cDNA 文库中钓取目的基因VEGF165 , 插入质粒PUC19 中并测序鉴定。构建真核表达重组质粒AdtrackCMV-VEGF165 转染 293 细胞, 用RNA 斑点杂交和Wester n blot 方法检测VEGF165 基因表达, 并通过Miles 试验检测VEGF165 蛋白活性。【结 果】PCR 产物为582 bp , 测序结果表明其序列正确, 在RNA 和蛋白水平检测到VEGF165 基因表达, VEGF165 蛋白相对分子 质量为22 ku , 具有生物学活性。【结论】成功地克隆了有表达生物学活性的VEGF165 基因。