牛pcDNA3-bFGF 真核表达重组体的构建与鉴定 - 徐 霖; 曹开源 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】构建并鉴定牛碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因真核表达质粒。【方法】设计含EcoRⅠ 和Xho Ⅰ 酶 切位点的bFGF cDNA 引物, 采用PCR 法从原核pET3c-bFGF 中扩增bFGF cDNA 片段, 纯化PCR 产物, EcoR Ⅰ 和Xho Ⅰ 双酶 切并连接至pcDNA3 , 转化感受态大肠杆菌DH5α, 酶切鉴定阳性重组子, 并进行序列测定。【结果】经PCR 能扩增出483 bp 的片段, 与预期片段大小相符, 构建的重组体经酶切鉴定能切出插入片段, 测序结果与预期序列完全一致。【结论】成功构建 了牛bFGF 真核表达重组体bFGF-pcDNA3 。