基因干扰Sirtuin3后对缺氧预处理的影响
【目的】 探讨基因干扰Sirtuin3（SIRT3）后对缺氧预处理的影响。【方法】 使用空白载体pGCSIL-GFP进行预实验，筛选适合的感染复数（MOI）。正式实验使用pGCSIL-PUR-SIRT3转染PC12细胞。成功构建空白载体（empty vector）及SIRT3-/-稳定细胞株后，将两种细胞分别分为对照组（control）；缺氧预处理+缺氧组(Hyp+OGD)；单纯缺氧组(OGD)；MTT测定细胞活性。ATP荧光检测试剂盒测定胞内的ATP水平。Western Blot法测定各组细胞内SIRT3、过氧化物酶体增生激活受体-γ的共刺激因子-1α(PGC-1α)，锰超氧化物歧化酶（Mn...
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| Format: | Article |
|---|---|
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2012-01-01
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| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43574911/ |
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| description | 【目的】 探讨基因干扰Sirtuin3（SIRT3）后对缺氧预处理的影响。【方法】 使用空白载体pGCSIL-GFP进行预实验，筛选适合的感染复数（MOI）。正式实验使用pGCSIL-PUR-SIRT3转染PC12细胞。成功构建空白载体（empty vector）及SIRT3-/-稳定细胞株后，将两种细胞分别分为对照组（control）；缺氧预处理+缺氧组(Hyp+OGD)；单纯缺氧组(OGD)；MTT测定细胞活性。ATP荧光检测试剂盒测定胞内的ATP水平。Western Blot法测定各组细胞内SIRT3、过氧化物酶体增生激活受体-γ的共刺激因子-1α(PGC-1α)，锰超氧化物歧化酶（MnSOD）的蛋白表达水平。【结果】OGD后SIRT3-/-组(0.430±0.009)与Vector组(0.562±0.140)相比，细胞活性下降更明显（P<0.05），经预处理后SIRT3-/-组细胞活性增加，且与Vector组间差异无统计学意义（P=0.311>0.05）。OGD后SIRT3-/-组（0.334±0.006）与Vector组（0.453±0.015）相比，ATP下降更明显（P<0.05）。经预处理后SIRT3-/-组ATP水平增加，且与Vector组间差异无统计学意义（P=0.866 >0.05）。SIRT3-/- 3组细胞间PGC-1α及MnSOD 蛋白的表达与Vector组对应的3组比较明显下降（P＜0.05）,Hyp+OGD及OGD相对于各自control组均上调（P＜0.05），且预处理组的上调更明显（与OGD组比较，P＜0.05） 【结论】 干扰SIRT3基因后PGC-1α及MnSOD的表达下降，SIRT3为预处理或缺氧处理上调PGC-1α及MnSOD的其中一条途径，干扰SIRT3后其他的途径仍然在预处理中发挥重要的细胞保护作用。 |
| format | Article |
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| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
| language | zho |
| publishDate | 2012-01-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
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