硫化氢通过抑制ｐ３８ ＭＡＰＫ通路和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的Ｈ９Ｃ２ 心肌细胞损伤和炎症 - 梁伟杰 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】 探讨外源性硫化氢（Ｈ２Ｓ）能否通过抑制ｐ３８ 丝裂原激活蛋白激酶（ｐ３８ ＭＡＰＫ）通路和坏死性凋亡的相互作用对抗高糖引起的Ｈ９Ｃ２ 心肌细胞损伤和炎症。【方法】 采用细胞计数试剂盒８（ＣＣＫ－８）检测心肌细胞的存活率；ＥＬＩＳＡ法检测细胞培养液中白介素－１β（ＩＬ－１β）和肿瘤坏死因子－α（ＴＮＦ－α）的水平；蛋白质免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ）测定ｐ３８ ＭＡＰＫ和ＲＩＰ３ 蛋白（反映坏死性凋亡的指标）的蛋白水平；双氯荧光素染色荧光显微镜照相测定细胞内活性氧（ＲＯＳ）水平；罗丹明１２３ 染色荧光显微镜照相测定线粒体膜电位（ＭＭＰ）。【结果】 Ｈ９Ｃ２心肌细胞经３５ ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖（高糖，ＨＧ）作用２４ ｈ，胞内ＲＩＰ３ 的蛋白水平明显增加，应用３ μｍｏｌ／Ｌ ＳＢ２０３５８０（ｐ３８ ＭＡＰＫ抑制剂）预处理心肌细胞６０ ｍｉｎ能明显地抑制ＨＧ对ＲＩＰ３ 蛋白水平的上调作用；另一方面，ＨＧ可上调磷酸化（ｐ）ｐ３８ ＭＡＰＫ的蛋白水平，应用１００ μｍｏｌ／Ｌ ｎｅｃｒｏｓｔａｔｉｎ－１（Ｎｅｃ－１，坏死性凋亡的特异性抑制剂）共处理心肌细胞２４ ｈ能阻断ＨＧ对ｐ－ｐ３８ ＭＡＰＫ蛋白水平的上调作用；而４００ μｍｏｌ／Ｌ ＮａＨＳ（为Ｈ２Ｓ的供体）预处理心肌细胞３０ ｍｉｎ能同时抑制ＨＧ对ＲＩＰ３ 和ｐ－ｐ３８ ＭＡＰＫ蛋白水平的上调作用。此外，４００ μｍｏｌ／Ｌ ＮａＨＳ、３ μｍｏｌ／Ｌ ＳＢ２０３５８０预处理或１００ μｍｏｌ／Ｌ Ｎｅｃ－１共处理心肌细胞均可抑制ＨＧ引起的心肌细胞毒性、氧化应激、线粒体损伤和炎症反应，使细胞存活率升高，ＲＯＳ生成、ＭＭＰ丢失及ＩＬ－１β和ＴＮＦ－ɑ的分泌水平减少。【结论】 抑制ｐ３８ ＭＡＰＫ通路和坏死性凋亡的相互作用可能是外源性Ｈ２Ｓ对抗高糖引起的Ｈ９ｃ２ 心肌细胞损伤和炎症的重要作用机制之一。