人Ⅰ型基质金属蛋白酶基因真核表达重组质粒的构建 - 彭 慧; 汪 谦; 黄洁夫 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】构建人Ⅰ 型基质金属蛋白酶基因(MMP1)真核表达重组质粒, 并进行序列分析。【方法】用逆转录聚 合酶链反应扩增人Ⅰ 型基质金属胶原酶cDNA, 获得目的基因片段(1 407 bp)连接至pcDNA3 载体, 并转化大肠杆菌DH5α, 筛 选阳性克隆并鉴定, 并对片断全长进行DNA 序列测定。【结果】所克隆人Ⅰ 型基质金属胶原酶cDNA, 含全长MMP1 编码区, 与GeneBank 公布序列比较, 仅1 318 位的胞苷酸C 突变为腺苷酸A。并成功构建了含有MMP1 的真核表达质粒pcDNA3- MM P1。【结论】以逆转录聚合酶链反应方法成功构建了人Ⅰ 型基质金属胶原酶cDNA 克隆, 并获得该基因真核表达质粒 pcDNA3-MMP1, 从而为下一步抗肝纤维化基因治疗研究提供物质基础。