PCR 和分离培养检测细胞培养支原体污染的比较 - 赖小敏 方国源 李彩霞 王传恩 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
目的: 检测细胞培养中支原体的污染, 建立支原体通用的 PCR 方法。方法: 根据已出版的序列设计并合成一对 支原体(柔膜体纲) 16S rRNA 基因组特异引物。对实验室所存的12 种支原体、大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养 细胞进行了 PCR 扩增。以 PCR 与分离培养比较检测了 33份细胞培养标本。结果: 12种支原体均出现了约 620 bp左右的特异 性扩增带,敏感性为 100～ 1 000个支原体细胞, 且常见的 6种细胞培养污染支原体的扩增片段均能被 H indⅢ切成 280 与 340 bp左右的 2 条带。理论上推测这对引物可扩增所有支原体 16S rDNA。但对大肠杆菌、变形杆菌及无支原体污染的组织培养 细胞等未见有扩增带出现。在对33份细胞培养标本的检测中, 除PCR 和分离培养同时检出 2份阳性外,前方法还另检出阳性 3 份。5份 PCR 扩增物均被 H indⅢ切出 2 条带。结论: PCR 较分离培养敏感性高,可提高细胞培养污染支原体的检出率, 防止 出现假阴性结果; 如做好质量控制, 对于一般实验室检测细胞培养支原体污染,PCR 扩增较分离培养具有更大的应用意义 。