MiR-127-3p靶向MAPK4对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响
【目的】探讨miR-127-3p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。【方法】通过RT-qPCR检测人葡萄膜黑色素瘤组织及细胞、正常组织及细胞中miR-127-3p与MAPK4mRNA的表达；通过Lipofectamine2000说明书将mimic-NC、miR-127-3pmimic、pc-MAPK4质粒分别或联合转染进入SP6.5或OM431细胞；通过双荧光素酶报告检测miR-127-3p与MAPK4复染靶向关系；通过CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell法检测细胞侵袭能力，蛋白印迹法检测AKT/mTOR通路蛋白相对表达水...
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| Main Authors: | , , , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2020-01-01
|
| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43566070/ |
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|---|---|
| author | 魏丽 连红梅 刘鹏 刘兴华 吴书一 刘萌萌 |
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| description | 【目的】探讨miR-127-3p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。【方法】通过RT-qPCR检测人葡萄膜黑色素瘤组织及细胞、正常组织及细胞中miR-127-3p与MAPK4mRNA的表达；通过Lipofectamine2000说明书将mimic-NC、miR-127-3pmimic、pc-MAPK4质粒分别或联合转染进入SP6.5或OM431细胞；通过双荧光素酶报告检测miR-127-3p与MAPK4复染靶向关系；通过CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell法检测细胞侵袭能力，蛋白印迹法检测AKT/mTOR通路蛋白相对表达水平。【结果】在葡萄膜黑色素瘤组织和细胞系中，miR-127-3p表达明显下调（P<0.01），而MAPK4表达明显上调（P<0.01）；miR-127-3p与MAPK43′UTR区存在结合位点，miR-127-3p高表达明显抑制了含有野生型MAPK4质粒的荧光素酶活性（P<0.01），但对突变型MAPK4质粒的荧光素酶活性无影响；与Control组相比，miR-127-3pmimic组SP6.5细胞和OM431细胞增殖均明显下降（P<0.01），凋亡率均明显增加（P<0.01），划痕闭合率均明显降低（P<0.01），每视野侵袭细胞数目均明显减少（P<0.01），p-AKT（T308）/AKT、p-mTORr（S473）/mTOR蛋白表达均明显下调（P<0.01），共转染pc-MAPK4逆转上述变化。【结论】MiR-127-3p通过靶向下调MAPK4来抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭，诱导细胞凋亡，这可能与抑制AKT/mTOR通路激活有关。 |
| format | Article |
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| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
| language | zho |
| publishDate | 2020-01-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| spelling | doaj-art-6188f92a17df4317860ef4476c5ac8a62025-01-15T02:36:08ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542020-01-014143566070MiR-127-3p靶向MAPK4对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响魏丽连红梅刘鹏刘兴华吴书一刘萌萌【目的】探讨miR-127-3p对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的作用。【方法】通过RT-qPCR检测人葡萄膜黑色素瘤组织及细胞、正常组织及细胞中miR-127-3p与MAPK4mRNA的表达；通过Lipofectamine2000说明书将mimic-NC、miR-127-3pmimic、pc-MAPK4质粒分别或联合转染进入SP6.5或OM431细胞；通过双荧光素酶报告检测miR-127-3p与MAPK4复染靶向关系；通过CCK-8法检测细胞增殖，流式细胞术检测细胞凋亡，划痕实验检测细胞迁移能力，Transwell法检测细胞侵袭能力，蛋白印迹法检测AKT/mTOR通路蛋白相对表达水平。【结果】在葡萄膜黑色素瘤组织和细胞系中，miR-127-3p表达明显下调（P<0.01），而MAPK4表达明显上调（P<0.01）；miR-127-3p与MAPK43′UTR区存在结合位点，miR-127-3p高表达明显抑制了含有野生型MAPK4质粒的荧光素酶活性（P<0.01），但对突变型MAPK4质粒的荧光素酶活性无影响；与Control组相比，miR-127-3pmimic组SP6.5细胞和OM431细胞增殖均明显下降（P<0.01），凋亡率均明显增加（P<0.01），划痕闭合率均明显降低（P<0.01），每视野侵袭细胞数目均明显减少（P<0.01），p-AKT（T308）/AKT、p-mTORr（S473）/mTOR蛋白表达均明显下调（P<0.01），共转染pc-MAPK4逆转上述变化。【结论】MiR-127-3p通过靶向下调MAPK4来抑制葡萄膜黑色素瘤细胞增殖、迁移和侵袭，诱导细胞凋亡，这可能与抑制AKT/mTOR通路激活有关。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43566070/葡萄膜黑色素瘤miR-127-3pMAPK4增殖迁移侵袭 |
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