C3H10T1/2成软骨分化过程中miR-19a与CCND1的 表达及调控
【目的】 在间充质干细胞诱导成软骨分化过程中,探讨miR-19a与细胞周期基因CCND1之间的关系,为揭示miR-19a参与调控成软骨分化的可能机制提供基础。【方法】 选取小鼠间充质干细胞C3H10T1/2为研究对象,运用离心沉淀法进行pellet细胞微球培养,用含有TGF-β3及2%FBS的高糖DMEM进行成软骨诱导并作为实验组,用含2%FBS的高糖DMEM培养(替换)导作为对照组。分别在1、2、3周进行定量PCR检测成软骨分化相关基因表达以及在第3周进行甲苯胺蓝染色。 【结果】 与对照组比较,细胞功能基因Bax与Klf-4表达均下调,差异具有统计学意义(P < 0.05)。成软骨分化关键启...
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Format: | Article |
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Language: | zho |
Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2015-01-01
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Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
Subjects: | |
Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43573070/ |
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description | 【目的】 在间充质干细胞诱导成软骨分化过程中,探讨miR-19a与细胞周期基因CCND1之间的关系,为揭示miR-19a参与调控成软骨分化的可能机制提供基础。【方法】 选取小鼠间充质干细胞C3H10T1/2为研究对象,运用离心沉淀法进行pellet细胞微球培养,用含有TGF-β3及2%FBS的高糖DMEM进行成软骨诱导并作为实验组,用含2%FBS的高糖DMEM培养(替换)导作为对照组。分别在1、2、3周进行定量PCR检测成软骨分化相关基因表达以及在第3周进行甲苯胺蓝染色。 【结果】 与对照组比较,细胞功能基因Bax与Klf-4表达均下调,差异具有统计学意义(P < 0.05)。成软骨分化关键启动因子SOX-9及相关基因aggrecan, collagen II, Collagen Xa1的表达均在2周时显著升高,差异具有统计学意义(P < 0.05)。通过互联网生物信息学预测CCND1可能是miR-19a的靶基因;在成软骨分化过程中,miR-19a表达逐渐上升(P < 0.05),而CCND1的表达与对照组相比逐渐下降(P < 0.05)。甲苯胺蓝染色pellet细胞微球呈蓝紫色,细胞核呈深蓝色,诱导组中细胞外基质含量明显增多。 【结论】 在C3H10T1/2成软骨分化过程中,miR-19a参与维持细胞干性及增殖基因表达降低,分化能力得到增强;且miR-19a参与该分化调控过程。 |
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language | zho |
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publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
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