长链非编码RNA GAPLINC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖表型的影响
目的探讨长链非编码RNA GAPLINC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖表型的影响。方法收集2022年1月至2022年12月于海南医学院附属海南医院行滑膜清理术或膝关节置换术的4例RA患者及3例创伤性关节炎废弃滑膜组织，分离培养并鉴定FLS细胞。通过qPCR法检测RA组和创伤组滑膜细胞内LncRNA GAPLINC表达水平。利用siRNA干扰技术靶向敲低GAPLINC表达，通过EdU法检测各组细胞增殖水平、流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布情况。通过qPCR法与WB法检测细胞周期调控蛋白cyclin D1、PCNA及周期抑制蛋白P21的表达水平。结果本研究通过qRCR验证发...
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| Main Authors: | , , , , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2023-09-01
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| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ（med.sci）.2023.0510/ |
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| _version_ | 1841528183085596672 |
|---|---|
| author | 莫碧瑶 肖璐 詹宇威 杨洋 刘莉 林书典 |
| author_facet | 莫碧瑶 肖璐 詹宇威 杨洋 刘莉 林书典 |
| author_sort | 莫碧瑶 |
| collection | DOAJ |
| description | 目的探讨长链非编码RNA GAPLINC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖表型的影响。方法收集2022年1月至2022年12月于海南医学院附属海南医院行滑膜清理术或膝关节置换术的4例RA患者及3例创伤性关节炎废弃滑膜组织，分离培养并鉴定FLS细胞。通过qPCR法检测RA组和创伤组滑膜细胞内LncRNA GAPLINC表达水平。利用siRNA干扰技术靶向敲低GAPLINC表达，通过EdU法检测各组细胞增殖水平、流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布情况。通过qPCR法与WB法检测细胞周期调控蛋白cyclin D1、PCNA及周期抑制蛋白P21的表达水平。结果本研究通过qRCR验证发现，RA组LncRNA GAPLINC表达水平明显高于创伤组（<italic>P</italic><0.05）；特异性siRNA对GAPLINC的干扰效率为（85.96±1.76）%（<italic>P</italic> <0.05）。敲低GAPLINC后，EdU细胞增殖实验显示，与空白对照组（6.02±0.48）%、溶剂对照组（6.32±1.48）%和阴性对照组（6.12±1.51）%相比，GAPLINC干扰组S期细胞占（2.89±1.53）%，较各对照组明显降低（P <0.05）。利用流式细胞术检测各组细胞周期分布，结果显示GAPLINC干扰组PI值，即S+G2/M期细胞所占的百分比为（14.92±5.34）%，明显低于空白对照组（29.68±8.48）%、溶剂对照组（28.97±6.82）%、阴性对照组（31.13±5.13）%（<italic>P</italic><0.05）。敲低GAPLINC后，与增殖表型正相关的基因Cyclin D1和PCNA的mRNA和蛋白水平均下降 （<italic>P</italic><0.05），而与增殖表型负相关的基因p21表达上调（<italic>P</italic><0.05）。结论LncRNA GAPLINC在RA-FLS细胞中高表达，敲低GAPLINC表达后，能显著降低RA-FLS细胞增殖活性，抑制细胞周期转化，提示LncRNA GAPLINC可能影响RA-FLS细胞增殖表型，导致滑膜异常增生，参与RA疾病的进展。 |
| format | Article |
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| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
| language | zho |
| publishDate | 2023-09-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
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| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| spelling | doaj-art-5ae00f570e114ae29ee902959a5407732025-01-15T03:54:04ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542023-09-014479280043757024长链非编码RNA GAPLINC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖表型的影响莫碧瑶肖璐詹宇威杨洋刘莉林书典目的探讨长链非编码RNA GAPLINC对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖表型的影响。方法收集2022年1月至2022年12月于海南医学院附属海南医院行滑膜清理术或膝关节置换术的4例RA患者及3例创伤性关节炎废弃滑膜组织，分离培养并鉴定FLS细胞。通过qPCR法检测RA组和创伤组滑膜细胞内LncRNA GAPLINC表达水平。利用siRNA干扰技术靶向敲低GAPLINC表达，通过EdU法检测各组细胞增殖水平、流式细胞术检测各组细胞的细胞周期分布情况。通过qPCR法与WB法检测细胞周期调控蛋白cyclin D1、PCNA及周期抑制蛋白P21的表达水平。结果本研究通过qRCR验证发现，RA组LncRNA GAPLINC表达水平明显高于创伤组（<italic>P</italic><0.05）；特异性siRNA对GAPLINC的干扰效率为（85.96±1.76）%（<italic>P</italic> <0.05）。敲低GAPLINC后，EdU细胞增殖实验显示，与空白对照组（6.02±0.48）%、溶剂对照组（6.32±1.48）%和阴性对照组（6.12±1.51）%相比，GAPLINC干扰组S期细胞占（2.89±1.53）%，较各对照组明显降低（P <0.05）。利用流式细胞术检测各组细胞周期分布，结果显示GAPLINC干扰组PI值，即S+G2/M期细胞所占的百分比为（14.92±5.34）%，明显低于空白对照组（29.68±8.48）%、溶剂对照组（28.97±6.82）%、阴性对照组（31.13±5.13）%（<italic>P</italic><0.05）。敲低GAPLINC后，与增殖表型正相关的基因Cyclin D1和PCNA的mRNA和蛋白水平均下降 （<italic>P</italic><0.05），而与增殖表型负相关的基因p21表达上调（<italic>P</italic><0.05）。结论LncRNA GAPLINC在RA-FLS细胞中高表达，敲低GAPLINC表达后，能显著降低RA-FLS细胞增殖活性，抑制细胞周期转化，提示LncRNA GAPLINC可能影响RA-FLS细胞增殖表型，导致滑膜异常增生，参与RA疾病的进展。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/doi/10.13471/j.cnki.j.sun.yat-sen.univ（med.sci）.2023.0510/长链非编码RNA类风湿关节炎滑膜增生成纤维样滑膜细胞细胞增殖 |
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