Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ２／ｍＫａｔｅ２双报告基因对小鼠骨髓间充质干细胞的标记及活体光学成像研究 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
摘 要： 【目的】 Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ２／ｍＫａｔｅ２双报告基因标记小鼠骨髓间充质干细胞（ｍＭＳＣ），并进行活体生物发光和荧光双模态光学成像研究。【方法】全骨髓细胞贴壁分离法提取ｍＭＳＣ，进行细胞表面标志物和多向分化潜能的鉴定；ＣＭＶ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ２－ｍＫａｔｅ２慢病毒感染ｍＭＳＣ，根据细胞内远红荧光蛋白ｍＫａｔｅ２的表达水平评估转染效率并利用流式细胞仪进行纯化筛选；对筛选后的ｍＭＳＣ（ｍＭＳＣ－ＣＭＶ－Ｌｕｃ２－ｍＫａｔｅ２，ｍＫａｔｅ２＋＞９５％）进行活体生物发光和荧光双模态光学成像。 【结果】成功分离ｍＭＳＣ；表型分析结果显示ｍＭＳＣ高表达Ｓｃａ－１ （９４．５％）、ＣＤ４４（９９．６％），低表达ＣＤ１１ｂ（０．０９２％）、ＣＤ４５（０．１１％）；ｍＭＳＣ具有成脂和成骨分化能力。ＣＭＶ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ２－ｍＫａｔｅ２慢病毒感染ｍＭＳＣ９６ ｈ后，细胞内ｍＫａｔｅ２的荧光表达率为２２．９７％，经流式细胞仪筛选后ｍＫａｔｅ２表达率大于９５％。对筛选后的ｍＭＳＣ进行活体生物发光成像和荧光成像可探测光信号，光信号强度与细胞数量呈明显线性正相关（生物发光成像为Ｒ２＝ ０．９８９３；荧光成像为Ｒ２ ＝ ０．９２２６）。 【结论】 ＣＭＶ－Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ２－ｍＫａｔｅ２慢病毒转染ｍＭＳＣ可稳定表达双报告基因Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ２和ｍＫａｔｅ２，体外可根据细胞内ｍＫａｔｅ２的表达水平间接评估转染效率、进行细胞筛选，活体内可同时进行生物发光成像和荧光成像，为ｍＭＳＣ体内移植后生物学行为的研究提供了良好、无创的定量示踪手段。