人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建
【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA, 进而成功筛选出真核表达载体pEGFP-C1-β 。 【结论】成功构建人pol-β 基因全长c...
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| Main Authors: | , , |
|---|---|
| Format: | Article |
| Language: | zho |
| Published: |
Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
2002-01-01
|
| Series: | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| Subjects: | |
| Online Access: | http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43587480/ |
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| _version_ | 1841528835702521856 |
|---|---|
| author | 杜柳涛 高 昆 何 云 |
| author_facet | 杜柳涛 高 昆 何 云 |
| author_sort | 杜柳涛 |
| collection | DOAJ |
| description | 【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤
维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向
克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获
得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA, 进而成功筛选出真核表达载体pEGFP-C1-β 。
【结论】成功构建人pol-β 基因全长cDNA 真核表达载体, 为进一步建立该基因的高表达细胞株提供基础。 |
| format | Article |
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| institution | Kabale University |
| issn | 1672-3554 |
| language | zho |
| publishDate | 2002-01-01 |
| publisher | Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University |
| record_format | Article |
| series | Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban |
| spelling | doaj-art-36c256b55b634670926945bbc24279522025-01-15T03:33:53ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542002-01-012343587480人DNA 聚合酶β 全长cDNA 的克隆、鉴定及真核表达载体的构建杜柳涛高 昆何 云【目的】克隆人类DNA 聚合酶(pol-β)基因全长cDNA, 构建该基因的真核高效表达载体。【方法】抽提人胚肺纤 维细胞HLF 总RNA 进行RT-PCR 扩增, 用pGEM-T 载体经T/A 克隆、DNA 测序确定后, 用双酶切将pol-β 全长cDNA 定向 克隆到绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C1 , 转染大肠杆菌DH5α, 筛选阳性克隆, 双酶切鉴定重组质粒。【结果】经RT-PCR 获 得1.03 kb 的产物, 经DNA 测序, 确定所扩增片段为人类pol-β 基因全长cDNA, 进而成功筛选出真核表达载体pEGFP-C1-β 。 【结论】成功构建人pol-β 基因全长cDNA 真核表达载体, 为进一步建立该基因的高表达细胞株提供基础。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43587480/DNA 聚合酶&beta/聚合酶链反应/DNA/ 重组 |
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