调节破骨细胞分化的RANK特异性cDNA片段的研究 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】 在生理条件下寻找调节破骨细胞(OC)分化的核转录因子NF-κB受体激动剂(RANK)的特异性cDNA功能片段,为研究OC分化机制提供理论基础。【方法】 先将RANK膜内部分的1.2 kb大小的cDNA分成20个片段,用缺失突变的方法构建出20个由肿瘤坏死因子受体1和RANK跨膜和膜内部分组成的TNFR1/RANK嵌合体的突变体,每一个突变体在RANK膜内部分含60 bp缺失。再将RANK-cDNA第1 561 ~ 1 680 bp之间的120 bp片段分为10个片段,构建10个新的TNFR1/RANK突变体,每一个突变体在其RANK膜内部分含12 bp缺失。用包装细胞Plat E分别将各突变体包装成逆转录病毒,通过感染分别将这些逆转录病毒转染到肿瘤坏死因子受体1和2基因敲除小鼠的骨髓巨噬细胞(BMM)中。用TNFɑ刺激后。观察哪一个突变体不能诱导OC形成。【结果】 首先发现表达TNFR1/RANK1561-1620或TNFR1/RANK1621-1680的逆转录病毒感染的BMM 不能分化成OC,然后在RANK-cDNA第1 561 ~ 1 680 bp这个大的片段中又发现表达TNFR1/RANK1597-1608。TNFR1/RANK1609-1620。TNFR1/RANK1621-1632或TNFR1/RANK1633-1644的逆转录病毒感染的BMM也不能分化成OC。【结论】 RANK-cDNA第1 597 ~ 1 644 bp之间的48 bp片段(5′-gggcaggtgatgaacttcaagggtgacatcatcgtggtgtatgtcagc-3′)对OC形成起决定性作用。