Caco-2细胞与肠道菌共培养初建体外模拟肠道共生模型 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】构建体外模拟肠道共生系统，用于评价食源性抗菌药及其耐药菌作用于肠道菌群时对人体健康造成的危害风险。【方法】21d体外培养构建Caco-2细胞三维肠上皮，分成无菌对照组、混合的正常菌群组、沙门氏菌组、混合菌群-沙门氏菌组4组，制备混悬液，各组分别单独和混合培养4h，荧光定量PCR法测试共培养前后各菌16SrDNA菌量变化，电阻仪测试跨膜上皮电阻(TEER)数量；免疫荧光染色观察紧密连接蛋白ZO-1变化，评价三维肠上皮屏障功能的改变。【结果】 在体外共培养模型内，4种肠道菌混合培养4h后同单独培养组间比较，细菌量增长无统计学差异（P＞0.05)）；需氧菌的增长速度明显高于厌氧菌(P＜0.01)，厌氧菌:需氧菌浓度比接近100:1，厌氧菌仍为优势菌。TEER和ZO-1免疫荧光染色结果均提示混合肠道菌群对Caco-2细胞三维肠上皮无明显破坏，侵入性沙门氏菌可显著降低TEER值，并观察到模型的ZO-1结构受到破坏。这种破坏作用在混合肠道菌群加沙门氏菌群组较轻。【结论】 Caco-2细胞三维肠上皮同乳双歧杆菌、植物乳酸杆菌、大肠杆菌和粪肠球菌组成的混合菌群体外共培养能建立稳定的体外肠上皮模型，并具有生物学活性；正常肠道菌群对侵入性沙门氏菌有拮抗作用。该模型可进一步完善作为食源性抗菌药、耐药菌与肠道系统相互作用研究模型的基础。