强型黄色荧光蛋白和VEGF 双基因载体在肝细胞共转染表达 - 王金林; 闵 军; 周晓东; 陈亚进 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】构建携带加强型黄色荧光素蛋白(EYFP)和人类血管内皮生长因子(VEGF)的双基因真核表达载体 pIRES-EYFP/ VEGF121 , 用EYFP 作标记基因, 研究外源性VEGF121 基因在大鼠原代培养肝细胞转染表达, 为实时监测 VEGF121基因修饰肝细胞移植后状态提供基础。【方法】将pcDNA3VEGF121中VEGF121定向克隆到pIRES-EYFP , 构建重组质 粒pIRES-EYFP/ VEGF121 , 经酶切、PCR 扩增和部分DNA 序列分析证实后, 转染大鼠原代培养肝细胞, 用荧光显微镜等观察 转染表达。【结果】酶切、PCR 扩增和部分DNA 序列分析等证明pIRES-EYFP/ VEGF121质粒成功构建, 转染大鼠原代培养肝 细胞后, 可以通过荧光显微镜观察到黄绿色荧光。【结论】构建了pIRES-EYFP/ VEGF121质粒, 为实时监测外源性VEGF121基 因转染表达和VEGF 基因修饰肝细胞的基因治疗奠定基础。