槲皮素调控AMPK活性诱导HL-60细胞自噬与凋亡 - 肖洁; 尹松梅; 谢双锋; 李益清; 聂大年; 马丽萍; 王秀菊; 吴裕丹; 刘红云 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】观察槲皮素对急性髓系白血病HL-60 细胞凋亡与自噬的影响及腺苷酸活化蛋白激酶 （AMPK）活性的变化，探讨槲皮素抗白血病的分子机制。【方法】流式细胞仪、电镜、蛋白质印迹法检测槲皮素孵 育HL-60细胞24、48 h后细胞凋亡与自噬的水平；检测槲皮素作用后HL-60细胞AMPK、p-AMPK的表达；流式、 蛋白质印迹法检测不同浓度槲皮素与AMPK小分子抑制剂Compound C共同孵育HL-60细胞后AMPK活化的情 况及细胞凋亡、自噬的变化。【结果】槲皮素可诱导HL-60细胞发生凋亡，且细胞凋亡率与槲皮素浓度、作用时 间呈正相关。槲皮素浓度越大，细胞凋亡率越高（P = 0.000）；随着作用时间的延长，细胞凋亡率进一步增加（P = 0.000）；不同浓度槲皮素（25和50 μmol/L）与HL-60细胞共同孵育24 h及48 h后，电镜观察到自噬体形成；绿色 荧光标记自噬体后用流式细胞仪对荧光强度进行检测，结果发现槲皮素作用后细胞内绿色荧光强度明显较对照 组增加（P = 0.001）；Western blot 检测LC3Ⅱ/Ⅰ比值增高（P < 0.001）；证实槲皮素能够诱导HL-60 细胞发生自 噬。槲皮素能够浓度依赖性的激活AMPK活性，使得AMPK的磷酸化水平增高（P = 0.001）。槲皮素与Compound C联合用药组与单用槲皮素组比较，p-AMPK的表达降低，Compound C能够阻断槲皮素诱导的AMPK磷酸化。槲 皮素+Compound C组与单用槲皮素组比较，细胞凋亡率下降（P < 0.001）；抑制AMPK的活性后，槲皮素诱导细胞 凋亡的作用减弱。槲皮素+Compound C组LC3Ⅱ/Ⅰ比值低于单用槲皮素组（P < 0.001）；抑制AMPK的活性后，槲 皮素诱导细胞自噬的作用减弱。【结论】槲皮素通过诱导HL-60细胞凋亡与自噬发挥抗白血病作用，AMPK可能 是槲皮素诱导细胞凋亡与自噬的重要信号分子。