登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用

登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用

【目的】 重组表达1型登革病毒(DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法。【方法】 RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化，用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体,用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法。【结果】 成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得...

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Format: Article
Language:zho
Published: Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University 2012-01-01
Series:Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
Subjects:
登革病毒
NS1蛋白
原核表达
多克隆抗体
Online Access:http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43574633/
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description 【目的】 重组表达1型登革病毒(DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法。【方法】 RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化，用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体,用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法。【结果】 成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得纯化的NS1蛋白;用重组NS1蛋白免疫BALB/c小鼠后获得高效价(> 1:30 000)的抗DENV-1和DENV-3 NS1的特异性抗体;用NS1多克隆抗体建立了登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法,该法可特异性检出登革病毒NS1抗原,敏感性达到1 ng/mL,与黄病毒的其它成员无交叉反应,表明具有良好的特异性。【结论】 本研究成功构建了DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,高效表达了具有良好免疫原性及免疫反应性的DENV-1和DENV-3重组NS1蛋白;建立了检测登革病毒NS1抗原的双抗体夹心法,并证明该检测法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。
format Article
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institution Kabale University
issn 1672-3554
language zho
publishDate 2012-01-01
publisher Editorial Office of Journal of Sun Yat-sen University
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series Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban
spelling doaj-art-16283c51898c4857811b3e0efc4620012025-01-15T03:00:50ZzhoEditorial Office of Journal of Sun Yat-sen UniversityZhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban1672-35542012-01-013343574633登革病毒NS1蛋白的原核表达及其在登革热快速诊断中的应用【目的】 重组表达1型登革病毒(DENV-1)和3型登革病毒(DENV-3)NS1蛋白,制备多克隆抗体,建立特异、敏感的登革病毒NS1抗原ELISA检测法。【方法】 RT-PCR扩增DENV-1和DENV-3 NS1全长基因,经T-A克隆后,将目的基因分别与质粒PET30a(+)连接构建重组质粒,转化大肠杆菌BL21感受态细胞,阳性克隆经IPTG诱导表达,并对目的蛋白进行纯化，用纯化的NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,制备鼠抗NS1多克隆抗体,用NS1多克隆抗体建立登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法。【结果】 成功构建了高效表达DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,获得纯化的NS1蛋白;用重组NS1蛋白免疫BALB/c小鼠后获得高效价(> 1:30 000)的抗DENV-1和DENV-3 NS1的特异性抗体;用NS1多克隆抗体建立了登革病毒NS1抗原双抗体夹心ELISA检测法,该法可特异性检出登革病毒NS1抗原,敏感性达到1 ng/mL,与黄病毒的其它成员无交叉反应,表明具有良好的特异性。【结论】 本研究成功构建了DENV-1和DENV-3 NS1蛋白的原核表达系统,高效表达了具有良好免疫原性及免疫反应性的DENV-1和DENV-3重组NS1蛋白;建立了检测登革病毒NS1抗原的双抗体夹心法,并证明该检测法具有较高的灵敏度和特异性,具有良好的应用前景。http://xuebaoyx.sysu.edu.cn/zh/article/43574633/登革病毒NS1蛋白原核表达多克隆抗体
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