小鼠β2m 正义与反义RNA 表达载体的构建及鉴定 - 孟 瑛; 黄绍良; 徐 劲; 吴忠道 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】构建小鼠β2 微球蛋白基因(β2 microglobulin gene, β2 m)正义及反义RNA 表达载体, 为研究降低细胞 MHC Ⅰ 类分子的表达作准备。【方法】从小鼠基因组获得的β2 m 克隆中以β2m-pSV2ΔHXgpt 为模板, 合成两对引物, 采用常 规PCR 方法分别扩增出β2m 引导区及其下游主要编码区, 即外显子1 及部分外显子2, 然后利用重叠延伸法将两条片段拼 接起来, 再将其分别正向、反向插入载体pcDNA3, 并进行限制性内切酶酶切鉴定及序列分析。【结果】构建出小鼠β2 m 正义 和反义RNA 表达载体pcDNA3-β2mSN 及pcDNA3-β2mAN。【结论】克隆的正义及反义β2 m 经限制性内切酶酶切鉴定结果 正确, 测序分析结果与文献一致, 从而为下一步降低移植排斥反应的体内外研究奠定了基础。