甲基转移酶3对人脑血管平滑肌细胞基因表达及增殖和迁移功能的影响 Effects of Methyltransferase 3 on Gene Expression, Proliferation, and Migration Functions of Human Brain Vascular Smooth Muscle Cells - 孟晨曦1，孙洪英2，张佳2，毛戬2，杨阳3，策乐木格3 (MENG Chenxi1, SUN Hongying2, ZHANG Jia2, MAO Jian2, YANG Yang3, Celemuge3 ) (Zhongguo cuzhong zazhi)
目的 探究甲基转移酶3（methyltransferase 3，METTL3）对人脑血管平滑肌细胞（human brain vascular smooth muscle cells，HBVSMC）基因表达以及增殖和迁移功能的影响。 方法 采用小干扰RNA（small interfering RNA，shRNA）干扰技术，构建METTL3基因干扰载体并通过腺病毒感染HBVSMC，依据感染情况将其分为空白组（无病毒感染）、对照组（空载病毒感染）和干扰组（METTL3-shRNA病毒感染）。使用逆转录实时定量PCR（real-time reverse transcriptional PCR，RT-qPCR）检测各组细胞脑小血管病相关基因锌指蛋白395（zinc finger protein 395，ZNF395）、锌指蛋白548（zinc finger protein 548，ZNF548）、DIS3样外泌体3’-5’核糖核酸外切酶（DIS3-like exosome 3’-5’exonuclease，DIS3L）、白细胞介素增强子结合因子3（interleukin enhancer binding factor 3，ILF3）和G蛋白偶联受体107（G protein-coupled receptor 107，GPR107）的mRNA表达水平，通过RNA甲基化免疫共沉淀（methylated RNA immunoprecipitation，MeRIP）技术检测以上基因mRNA的N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine，m6A）修饰水平，利用细胞计数试剂盒8（cell counting kit 8，CCK8）、Transwell小室实验检测各组HBVSMC的增殖和迁移能力。 结果 与空白组相比，对照组细胞各基因的mRNA相对表达水平未发生明显改变。与对照组相比，干扰组细胞ZNF395（P=0.02）、ZNF548（P=0.03）、DIS3L（P=0.02）和GPR107（P＜0.01）的mRNA相对表达水平，以及ZNF395（P＜0.01）和ZNF548（P＜0.01）的m6A修饰水平均降低。与对照组相比，干扰组HBVSMC的增殖和迁移能力明显增强。 结论 在HBVSMC中干扰METTL3基因表达可能通过下调靶基因ZNF395和ZNF548 mRNA的m6A修饰水平进而增强HBVSMC的增殖和迁移能力。