人 CD134L 基因原核表达载体的构建、鉴定及序列分析 - 张 强; 张春艳; 宁 波; 陈琼玲 (Zhongshan Daxue xuebao. Yixue kexue ban)
【目的】克隆人 CD134L 的 cDNA,构建人 CD134L 的原核表达载体 pGEX-4T-1/hCD134L,并进行序列分析。【方法】以 EB 病毒 转化健康人外周血 B 淋巴细胞,从激活的EB 病毒转化的 B细胞中提取总 RNA,采用 RT-PCR 方法扩增出人CD134L cDNA,经 BamHⅠ和 Sal Ⅰ双酶切后,克隆入原核表达载体 pGEX-4T-1,构建高效表达载体 pGEX-4T-1/CD134L,经限制性内切酶酶切分析和 cDNA 序列分析鉴定重组质粒。【结果】人CD134L cDNA 已正确克隆到原核表达载体 pGEX-4T-1 中,测序结果表明中国人CD134L cDNA 与GenBank 国外报告的完全 一致。【结论】本研究成功构建人CD134L 的原核表达载体,为下一步进行人 CD134L 与自身免疫性疾病的关系奠定基础。